[發明專利]檢測精細胞中細胞內感染原的方法

有效

• 申請號: 201380023706.3
• 申請日: 2013-03-29
• 公開（公告）號: CN104303059A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 瓦西利奧斯·齊列瓦可斯;阿格勒斯·格瑞扎培斯
• 申請（專利權）人: 瓦西利奧斯·齊列瓦可斯;阿格勒斯·格瑞扎培斯
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 浦彩華;張穎玲

技術領域

本發明描述了一種方法，用于使精液(即精子細胞群)經受分析，以檢測精子內部的細胞內病毒、衣原體、寄生物和其他微生物，試圖研究和確定低生育力和不育癥的病因，以及預防先天性感染。整個程序是使用用于緩和DNA結構、用抗體靶向微生物和用流式細胞儀來評價結果的特定過程完成的。

背景技術

低生育力是目前越來越常見的問題，影響到許多家庭。為解決這一問題，已開發出來許多方法，包括體外受精(IVF)。

輸卵管阻塞、無精子癥和絕經期是低生育力的無可爭議的原因。少精癥和絕經前期是無精子癥和絕經期的早期階段，也是人們感興趣的，因為它們是導致低生育力的漸進的重要因素。特別是少精癥，應該是通過IVF容易解決的一個問題，因為一個單獨的精子用于受孕應該是足夠的。然而，在實踐中，情況并非如此。

對于精子，存在各種已被廣泛研究的定性的缺陷，并且這些缺陷特別影響精子質量的兩個評價參數：形態學和運動性。運動性為胚胎學家提供了IVF嘗試的關于用于微受精的精子的適宜性的僅僅大致的信息。另一方面，精子形態是用于評價精子適合或不適合受精的一個更準確的標準。然而，精子形態不能直接用作對選擇良好精子以用在IVF中作為所使用的精子的度量，因為精子樣品的形態學特征在這個過程中被破壞。根據上述情況，顯然有很多方法來評價精子樣品(世界衛生組織人類精液特征的參考值，人類生殖更新(Human?Reproduction?Update)2009)，這些方法在觀察低生育力的夫婦時被考慮到，這些夫婦中的許多會繼續使用IVF的方法。

精子樣品的最終特征將是對每個檢查的精子的所檢測到的全部特定的形態異常的組合評價的結果。特征在于不存在這些異常的精子被歸類為“合適”或“正常”。此外，還已經通過畸形精子癥指數(TZI)給出生理數值，其測量每個異常精子形態異常的平均值。也可以通過測量樣品中凋亡的精子的百分比，即已經進入程序性細胞死亡過程中的精子，以評估精子質量。

然而，每一個精子異常可以歸因于一個特定的原因。這種原因可以是微生物，例如在慢性前列腺炎的情況下，或其它因素如吸煙、肥胖、過度的體育鍛煉、高溫等。

相反，病毒因素作為男性低生育力的一個原因到現在為止尚未得到醫學界的十分關注。在2004年和2005年，在美國生殖免疫學雜志(American?Journal?of?Reproductive?Immunology)的兩個出版物中，勒克斯梅迪卡斯S.A.(Locus?Medicus?S.A.)的研究人員(包括V.茨利瓦克斯(V.Tsilivakos)，本發明的發明人)描述了在有低生育力和/或流產病史的女性的血液中高數目的自然殺手(以下簡稱NK)淋巴細胞與亞臨床的皰疹病毒血癥(HSV1-2、EBV、CMV、HHV6和HHV7)的存在之間的相關性。

隨后，諸位發明人在流產的材料中觀察到NK淋巴細胞大多聚集在著床部位，而這些婦女的血液NK水平是正常的。根據諸位發明人的理論，如果歸因于通過精細胞(包括精子)而源于男性的病毒(至少皰疹性)抗原的存在，在這種情況下的胚胎本身是抗原性的，這是可以解釋的。這些抗原會被表達，并通過胎兒細胞呈現給女性的免疫系統從而引起NK效應。

然而，當我們試圖通過傳統的診斷方法，如精子形態學或精液分析的其他參數，來建立病毒因素的存在時，我們發現這是行不通的。

要解決的問題

當一對夫婦到達不育癥門診時，正確的做法是調查問題的原因。許多癥狀和體征被牽連為不育癥所涉及的因素，但它們中的許多不是主要原因，它們本身是其它因素的結果，這些因素通常本質上是傳染性的，其根治或遏制可能有助于治療。例如，我們知道，衣原體或其它微生物在輸卵管中的存在可導致輸卵管阻塞，先是暫時性的，但如果沒有進行治療性干預，則可以是永久的。同樣，精細胞(包括精子)由于細胞凋亡而DNA片段化，這常是男性生殖道的不同部分的細菌性或可能是病毒性感染，以及其它因素，如氧化應激的結果。