[發明專利]檢測精細胞中細胞內感染原的方法

有效

• 申請號: 201380023706.3
• 申請日: 2013-03-29
• 公開（公告）號: CN104303059A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 瓦西利奧斯·齊列瓦可斯;阿格勒斯·格瑞扎培斯
• 申請（專利權）人: 瓦西利奧斯·齊列瓦可斯;阿格勒斯·格瑞扎培斯
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 浦彩華;張穎玲

1.用于調查精子中細胞內病毒、衣原體、寄生物和其他感染性病原體的存在的方法，該方法包括以下步驟：

-一種程序，用于

-緩和包括精子的精細胞的DNA的致密結構，

-直接或間接的精細胞內免疫熒光，

-通過流式細胞術可視化并評價結果，

并且該方法的特征在于以下事實：緩和該DNA的致密結構的步驟必須在免疫熒光之前進行。

2.根據權利要求1所述的方法，其中通過流式細胞術可視化并評價結果的步驟包括：用WB中的7-氨基放線菌素D(7AAD)孵育細胞沉淀，以使得能夠在1N和2N細胞之間進行辨別。

3.根據權利要求1或2中任一項所述的方法，其用于確定不育癥、早期妊娠失敗流產或胎兒損失的原因，并用于預防先天性感染或用于預防垂直傳遞，并且也用于調查男性生殖系統的炎癥與感染。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其具體用于調查以下感染原中的一種：巨細胞病毒(CMV)、單純性皰疹病毒I(HSV?I)、單純性皰疹病毒II(HSV?II)、愛潑斯坦巴爾病毒(EBV)、HHV6、HHV7、HHV8、細小病毒19、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、柯薩奇病毒、人類免疫缺陷病毒(HIV-1、HIV-2)、腺相關病毒(AAV)、風疹病毒、HPV、衣原體、弓形體和諾瓦克病毒。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其用于調查精子中衣原體的存在，結合使用相同的樣品或關于不同的樣品的精子發生圖和培養。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中精子DNA的非常致密的DNA結構的緩和是以DNA消化進行的。

7.根據權利要求6所述的方法，其中DNA消化是用斷裂DNA的一種酶來完成的。

8.根據權利要求6或7中任一項所述的方法，其中該斷裂DNA的酶是DNA酶I。

9.根據權利要求1至8中任一項所述的方法，其中任何適當標記的抗抗體可被用于熒光。

10.根據權利要求9所述的方法，其中任何熒光染料可被用于熒光，以下中的任一項熒光染料處于其中：熒光素-5-異硫氰酸酯(FITC)、氨基甲基香豆素乙酸酯(AMCA?350)、6,8-二氟-7-羥基香豆素衍生物(海洋藍)、瀑布藍、亞莉克莎螢石405、6,8-二氟-7-羥基香豆素衍生物(太平洋藍)、亞莉克莎螢石430、瀑布黃、亞莉克莎螢石488、藻紅蛋白(PE)、藻紅蛋白德克薩斯紅(PE-德克薩斯紅)、藻紅蛋白-花色素苷5(PE-Cy5)、多甲藻素葉綠素蛋白(PerCP)、多甲藻素葉綠素蛋白-花色素苷5.5(PerCP-Cy5.5)、藻紅蛋白-花色素苷7(PE-Cy7)、羅丹明TR、別藻藍蛋白(APC)、亞莉克莎螢石647、別藻藍蛋白花色素苷7(APC-Cy7)、BD?APC-H7、亞莉克莎螢石700。

11.根據權利要求1至10中任一項所述的方法，其中包括一個外部免疫熒光的額外步驟。

12.用于調查精子內部病毒、衣原體、寄生物和其他病原體的存在的試劑盒，該試劑盒至少包括以下各項：

-可以緩和精子細胞的DNA的一種物質，

-適合用于對抗感興趣的感染原的一種或多種抗體。

13.根據權利要求12所述的試劑盒，其中該DNA消化物質是任何DNA消化酶。