[發明專利]制備生理活性多肽復合物的改進方法

在審

• 申請號: 201380023673.2
• 申請日: 2013-03-08
• 公開（公告）號: CN104271604A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 張明賢;金玟永;李鐘守;金大振;裴城敏;權世昌
• 申請（專利權）人: 韓美科學株式會社
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K1/10;A61K47/48
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 趙蓉民;陸惠中

1.制備生理活性多肽-非肽基聚合物-免疫球蛋白恒定區復合物的方法，其包括：

(1)使具有兩個或更多個醛作為官能團的非肽基聚合物與生理活性多肽或免疫球蛋白恒定區的其中之一在濃度為1-20mM的還原劑的存在下反應；和

(2)使步驟(1)的反應混合物與生理活性多肽或免疫球蛋白恒定區中的另一個在濃度為1-100mM的還原劑的存在下反應。

2.權利要求1所述的方法，進一步包括：在步驟(1)之后，從所述反應混合物中分離出生理活性多肽-非肽基聚合物的結合物或免疫球蛋白恒定區-非肽基聚合物的結合物。

3.權利要求1所述的方法，其中所述還原劑的作用是還原在所述非肽基聚合物的所述醛基與所述生理活性多肽或所述免疫球蛋白恒定區的胺基之間結合所產生的可逆性亞胺雙鍵以形成共價鍵。

4.權利要求1所述的方法，其中所述還原劑選自氰基硼氫化鈉、硼烷吡啶復合物、硼氫化鈉、硼烷二甲基胺復合物、硼烷三甲基胺復合物和三乙酰氧基硼氫化鈉。

5.權利要求1所述的方法，其中在步驟(2)中，所述還原劑的使用濃度為1至40mM。

6.權利要求1所述的方法，其中步驟(1)中的所述反應進行1至16小時。

7.權利要求1所述的方法，其中步驟(2)中的所述反應進行1至48小時。

8.權利要求1所述的方法，其中步驟(1)中的所述反應在0至25℃的溫度下進行。

9.權利要求1所述的方法，其中步驟(1)中的所述反應在0至25℃下，在濃度為1至20mM的所述還原劑的存在下進行1至16小時，并且步驟(2)中的所述反應在濃度為1至40mM的所述還原劑的存在下進行1至48小時。

10.權利要求1所述的方法，其中所述非肽基聚合物通過其兩個或更多個醛官能團共價連接至所述生理活性多肽和所述免疫球蛋白恒定區的每一個。

11.權利要求1所述的方法，其中所述非肽基聚合物的所述官能團連接至所述生理活性多肽和所述免疫球蛋白恒定區的各自的胺基，其中所述胺基存在于N-末端或Lys殘基的側鏈上。

12.權利要求1所述的方法，其中所述非肽基聚合物選自聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物、聚氧乙基化多元醇、聚乙烯醇、多糖、葡聚糖、聚乙烯基乙基醚、聚乳酸(PLA)、聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)、脂質聚合物、殼多糖、玻尿酸、和其組合。

13.權利要求1所述的方法，其中所述非肽基聚合物是聚乙二醇。

14.權利要求1所述的方法，其中所述非肽基聚合物的分子量范圍是從1至100kDa。

15.權利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定區是無糖基化的。

16.權利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定區由一個至四個結構域組成，所述一個至四個結構域選自C_H1、C_H2、C_H3和C_H4結構域。

17.權利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定區進一步包括鉸鏈區。

18.權利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定區選自衍生自IgG、IgA、IgD、IgE、IgM的恒定區、或其組合或雜化物。

19.權利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定區選自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的恒定區、其組合、和其雜化物。

20.權利要求1所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定區是IgG4?Fc區。

21.權利要求20所述的方法，其中所述免疫球蛋白恒定區是無糖基化的人IgG4?Fc區。