[發明專利]角質酶變體以及對其進行編碼的多核苷酸

在審

• 申請號: 201380023398.4
• 申請日: 2013-04-30
• 公開（公告）號: CN104271737A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: A.巴蘇;S.奈克;S.梅帕達姆瓦蘇;P.普里蒂什;R.賽基亞;A.斯文德森
• 申請（專利權）人: 諾維信公司
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張文輝

1.一種親本角質酶的分離的變體，該變體包括在與SEQ?ID?NO:2的成熟多肽的氨基酸殘基31、36、45、52、70、120、143、167、以及174相對應的一個或多個位置處的取代，該取代選自下組，該組由以下各項組成：

P31A,R,N,D,C,Q,E,G,H,I,L,K,M,F,S,T,W,Y,V；

I36A,R,N,D,C,Q,E,G,H,L,K,M,F,P,S,T,W,Y,V；

G45A,R,N,D,C,Q,E,H,I,L,K,M,F,P,S,T,W,Y,V；N52E；

F70A,R,N,D,C,Q,E,G,H,I,L,K,M,P,S,T,W,Y,V；G120S；

G143A,R,N,D,C,Q,E,H,I,L,K,M,F,P,S,T,W,Y,V；L167A；以及L174N,Q，并且該變體具有角質酶活性。

2.如權利要求1所述的變體，其中相對于該親本的角質酶活性，該變體的角質酶活性更高。

3.如權利要求1-2中任一項所述的變體，其中該角質酶活性是在短鏈烷基酯底物上測量的，優選地其中該底物選自下組，該組由以下各項組成：異丁酸甲酯、三甲基乙酸甲酯、丁烯酸甲酯、以及甲基丙烯酸甲酯。

4.如權利要求1至3中任一項所述的變體，該變體是選自下組的一種親本角質酶的一種變體，該組由以下各項組成：

a.一種與SEQ?ID?NO:2的成熟多肽具有至少70％序列一致性的多肽；

b.一種由以下多核苷酸編碼的多肽，該多核苷酸與SEQ?ID?NO:1的成熟多肽編碼序列具有至少70％一致性；以及

c.SEQ?ID?NO:2的成熟多肽的一個片段，該片段具有角質酶活性。

5.如權利要求1-4中任一項所述的變體，其中該親本角質酶包括SEQ?ID?NO:2的成熟多肽或由其組成。

6.如權利要求1-5中任一項所述的變體，其中該親本角質酶是SEQ?ID?NO:2的成熟多肽的一個片段，其中該片段具有角質酶活性。

7.如權利要求1-6中任一項所述的變體，該變體與該親本角質酶的氨基酸序列具有至少70％，例如至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％一致性，至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％的序列一致性。

8.如權利要求1-6中任一項所述的變體，該變體與SEQ?ID?NO:2的成熟多肽具有至少70％，例如至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列一致性。

9.如權利要求1-8中任一項所述的變體，其中該變體由100至194個、150至194個、100至150個、或150至194個氨基酸組成。

10.如權利要求1-9中任一項所述的變體，其中取代的數目是1-20個，例如1-10個和1-5個，如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個、16個、17個、18個、19個、或20個取代。

11.如權利要求1-10中任一項所述的變體，該變體包括在與SEQ?ID?NO:2的成熟多肽的氨基酸殘基31、36、45、52、70、120、143、167、以及174中的任一個相對應的兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個或九個位置處的取代，該取代選自下組，該組由以下各項組成：

P31A,R,N,D,C,Q,E,G,H,I,L,K,M,F,S,T,W,Y,V；

I36A,R,N,D,C,Q,E,G,H,L,K,M,F,P,S,T,W,Y,V；

G45A,R,N,D,C,Q,E,H,I,L,K,M,F,P,S,T,W,Y,V；N52E；

F70A,R,N,D,C,Q,E,G,H,I,L,K,M,P,S,T,W,Y,V；G120S；

G143A,R,N,D,C,Q,E,H,I,L,K,M,F,P,S,T,W,Y,V；L167A；以及L174N,Q。