[發明專利]用于監測HIV特異性T細胞應答的方法

在審

• 申請號: 201380022862.8
• 申請日: 2013-03-22
• 公開（公告）號: CN104272108A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 瑪爾塔·魯伊斯里奧爾;克里斯蒂安·布蘭德;哈維爾·伊瓦龍多
• 申請（專利權）人: 埃斯特韋實驗室有限公司;私人艾滋病研究基金會-銀行;加泰羅尼亞高等研究院
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N33/569
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;彭鯤鵬

1.一種用于測定對象中特異性針對病原體之T細胞應答的方法，其包括：i)使包含來自所述對象之T細胞的樣品與包含來自所述病原體之抗原的組合物接觸，以及ii)測定由所述樣品中的所述T細胞產生的多種細胞因子的水平。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述包含抗原的組合物是抗原或抗原文庫。

3.根據權利要求2所述的方法，其中來自所述病原體的所述抗原或所述抗原文庫是來源于所述病原體之多肽的肽變體或肽變體文庫。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述肽變體文庫是切換肽。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述病原體是HIV或EBV。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述肽變體來源于Gag或Nef多蛋白。

7.根據權利要求6所述的方法，其中所述肽變體來源于p24或p17。

8.根據權利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述多種細胞因子選自：表征Th1應答的細胞因子、表征Th2應答的細胞因子和二者皆有。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述表征Th1應答的細胞因子選自IFN-γ、TNF-α、MIP1-β、IL-2、IL-12和IL-1B。

10.根據權利要求8所述的方法，其中所述表征Th2應答的細胞因子選自IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13。

11.根據權利要求1至10中任一項所述的方法，其中在CD4+細胞和/或CD8+細胞中測定所述表征Th1應答的細胞因子、所述表征Th2應答的細胞因子或二者皆有。

12.根據權利要求8至11中任一項所述的方法，其還包括測定表征Th9應答、Th17應答或Th22應答之細胞因子的水平。

13.根據權利要求1至12中任一項所述的方法，其中通過加強的流式細胞術測定所述多種細胞因子的水平。

14.根據權利要求1至13中任一項所述的方法，其中所述含有T細胞的樣品是PBMC制備物。

15.一種用于鑒定高度暴露的持續血清反應陰性患者的方法，其包括：i)用HIV或EBV肽組合物孵育含有所述患者之T細胞的樣品，以及ii)測定選自IL-1b、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-17和IL-22的一種或更多種細胞因子的水平，

其中一種或更多種所述細胞因子的表達水平相對于參考值升高表明所述患者是高度暴露的持續血清反應陰性患者。

16.根據權利要求15所述的方法，其中所述HIV肽組合物包含來源于Gag?p24HIV蛋白或Gag?p17HIV蛋白或Nef蛋白的肽。

17.根據權利要求16所述的方法，其中所述來源于Gag?p24HIV蛋白或Gag?p17HIV蛋白或Nef蛋白的肽是切換肽。

18.根據權利要求15至17中任一項所述的方法，其中所述含有T細胞的樣品是PBMC制備物。

19.根據權利要求16至18中任一項所述的方法，其中各種細胞因子的參考值是含有來自HIV感染患者之T細胞的樣品中所述細胞因子的表達水平。

20.根據權利要求15至19所述的方法，其中通過流式細胞術分析進行所述細胞因子水平的測定。

21.根據權利要求20所述的方法，其中所述流式細胞術分析是加強的流式細胞術。

22.一種試劑盒，其包含用于檢測選自IL-1b、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-17和IL-22的一種或更多種細胞因子的試劑。

23.一種用于鑒別高度暴露的持續血清反應陰性患者的方法，其包括：i)用來源于HIV或EBV蛋白的肽組合物孵育所述患者的含有T細胞的樣品，以及ii)測定Th1樣應答、Th2樣應答或Th17應答，其中所述細胞中Th1樣應答、Th2樣應答或Th17應答相對于參考值升高表明所述患者是高度暴露的持續血清反應陰性患者。