[發(fā)明專利]用于監(jiān)測(cè)HIV特異性T細(xì)胞應(yīng)答的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380022862.8
• 申請(qǐng)日: 2013-03-22
• 公開（公告）號(hào): CN104272108A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 瑪爾塔·魯伊斯里奧爾;克里斯蒂安·布蘭德;哈維爾·伊瓦龍多
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 埃斯特韋實(shí)驗(yàn)室有限公司;私人艾滋病研究基金會(huì)-銀行;加泰羅尼亞高等研究院
• 主分類號(hào): G01N33/50
• 分類號(hào): G01N33/50;G01N33/569
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;彭鯤鵬

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明總體涉及用于監(jiān)測(cè)HIV特異性T細(xì)胞應(yīng)答和鑒定能夠控制HIV發(fā)展或預(yù)防HIV感染之對(duì)象的方法和診斷試劑盒。

背景技術(shù)

人免疫缺陷病毒(HIV)序列多樣性是在體外可靠評(píng)估抗病毒T細(xì)胞免疫和設(shè)計(jì)有效且廣泛適用的HIV疫苗的主要障礙。參見Brander?C等，Curr.Opin.Immunol.2006；18(4)：430-437。

盡管在全基因組水平上具有廣泛的HIV序列多樣性，但是病毒蛋白質(zhì)在個(gè)別位置的變化通常局限于在不同HIV進(jìn)化枝中重現(xiàn)或“切換(toggle)”的有限數(shù)量的氨基酸替換。參見Gaschen?B等，Science?2002；296：2354-2360。切換殘基(toggling?residue)通常包括氨基酸對(duì)例如精氨酸(R)和賴氨酸(K)或者亮氨酸(L)和纈氨酸(V)，這些氨基酸對(duì)在生物化學(xué)上類似，因此可能被病毒耐受而不嚴(yán)重影響其復(fù)制效率。顯著地，大部分Gag?p24(高保守蛋白質(zhì)的代表)切換肽(toggled?peptide)混合物僅需要不到20種變體(中值為4)，即使在最高水平的序列覆蓋率(即，僅從切換位置排除存在于＜5％的數(shù)據(jù)庫(kù)序列中的氨基酸)下也是如此，而在該覆蓋率下在其他Gag亞基中變體數(shù)目更高。參見Yusim?K等，J.Virol.2002；76(17)：8757-8768。在IFN-γElispot測(cè)定中，已經(jīng)表明，與匹配的共有序列肽相比，這些“切換”肽檢測(cè)HIV特異性CD4+和CD8+T細(xì)胞應(yīng)答的幅度(breath)和量級(jí)(magnitude)顯著更高。參見Frahm?N等，J.Immunol.2007；179：6638-6650。

用于HIV疫苗接種的免疫原候選物的大部分研究以通過(guò)Elispot分析IFN-γ產(chǎn)量為基礎(chǔ)。迄今，沒有發(fā)現(xiàn)IFN-γ的量級(jí)或分泌與病毒載量之間的直接相關(guān)性。在過(guò)去的數(shù)年，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)針對(duì)HIV抗原決定簇的T細(xì)胞應(yīng)答的質(zhì)量可能是引起針對(duì)病毒的有效應(yīng)答的關(guān)鍵決定性因素。然而，對(duì)HIV感染患者中CD8+T淋巴細(xì)胞的多功能應(yīng)答(例如，分泌不同細(xì)胞因子和穿孔胞吐)的分析已經(jīng)表明T淋巴細(xì)胞的多功能能力與病毒載量之間的負(fù)相關(guān)性。另外，流式細(xì)胞術(shù)和基于Elispot的分析可能無(wú)法檢測(cè)與非定期測(cè)量或未表現(xiàn)出預(yù)期的一種或更多種效應(yīng)功能譜之細(xì)胞因子相關(guān)的應(yīng)答。因此，本領(lǐng)域需要更靈敏和綜合的方法以評(píng)估針對(duì)HIV的T細(xì)胞應(yīng)答。

發(fā)明內(nèi)容

在第一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種用于測(cè)定對(duì)象中特異性針對(duì)病原體的T細(xì)胞應(yīng)答的方法，其包括：i)使包含來(lái)自所述對(duì)象之T細(xì)胞的樣品與包含來(lái)自所述病原體之抗原的組合物接觸，以及ii)測(cè)定由所述樣品中的T細(xì)胞產(chǎn)生的多種細(xì)胞因子的水平。

在第二個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種用于鑒定高度暴露的持續(xù)血清反應(yīng)陰性患者的方法，其包括：i)用HIV或EBV肽組合物孵育含有所述患者之T細(xì)胞的樣品，以及ii)測(cè)定選自IL-1b、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-17和IL-22的一種或更多種細(xì)胞因子的水平，其中一種或更多種所述細(xì)胞因子的表達(dá)水平相對(duì)于參考值升高表明所述患者是高度暴露的持續(xù)血清反應(yīng)陰性患者。

在第三個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種試劑盒，其包含用于檢測(cè)選自IL-1b、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-17和IL-22的一種或更多種細(xì)胞因子的試劑。

在第四個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種用于鑒定高度暴露的持續(xù)血清反應(yīng)陰性患者的方法，其包括：i)用來(lái)源于HIV蛋白或EBV蛋白的肽組合物孵育所述患者的含有T細(xì)胞的樣品，以及ii)測(cè)定Th1樣應(yīng)答、Th2樣應(yīng)答或Th17應(yīng)答，其中所述細(xì)胞中Th1樣應(yīng)答、Th2樣應(yīng)答或Th17應(yīng)答相對(duì)于參考值升高表明所述患者是高度暴露的持續(xù)血清反應(yīng)陰性患者。

附圖簡(jiǎn)述

圖1.僅由切換肽刺激引起的細(xì)胞應(yīng)答。HIV患者在幅度和量級(jí)方面均比HEPS個(gè)體表現(xiàn)出更高的應(yīng)答。在控制者組和非控制者組之間未觀察到顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在HEPS組還檢測(cè)到了較少和較弱的應(yīng)答。