[發(fā)明專利]尿激酶型纖溶酶原激活劑轉(zhuǎn)基因小鼠

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380022371.3
• 申請日: 2013-04-25
• 公開（公告）號: CN104334017A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 小原道法;寺社下浩一;川瀬洋介;向谷知世;大下浩樹;浜村理子
• 申請（專利權(quán)）人: 公益財團法人東京都醫(yī)學(xué)綜合研究所;中外制藥株式會社;飛氏生物株式會社
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;G01N33/15;G01N33/50;C12N15/09
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 金世煜;苗堃

1.一種以雜合體型具有uPA基因的肝損傷小鼠的制作方法，其特征在于，具有以下工序：

(i)利用DNA片段轉(zhuǎn)化小鼠ES細胞的工序，所述DNA片段含有肝特異性啟動子/增強子以及在它們的控制下可驅(qū)動地被連接的編碼尿激酶型纖溶酶原激活劑的cDNA；

(ii)將工序(i)得到的轉(zhuǎn)化了的小鼠ES細胞注入宿主胚胎的工序；

(iii)將工序(ii)得到的注入了ES細胞的宿主胚胎移植到代孕母小鼠的子宮獲得嵌合體小鼠的工序；以及

(iv)將工序(iii)得到的嵌合體小鼠交配，得到以雜合體型導(dǎo)入了該DNA片段的轉(zhuǎn)基因小鼠的工序。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，進一步具有(v)獲得2～3周齡的血清ALT值是30Karmen單位以上的轉(zhuǎn)基因小鼠的工序。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，肝特異性啟動子是白蛋白啟動子。

4.一種肝損傷小鼠及其一部分，其特征在于，是利用權(quán)利要求1～3的方法制作的。

5.一種免疫缺陷肝損傷小鼠，其特征在于，是通過將權(quán)利要求4所述的肝損傷小鼠與SCID小鼠交配而得到的。

6.一種嵌合體小鼠的制作方法，其特征在于，包括對權(quán)利要求5所述的免疫缺陷肝損傷小鼠移植人肝細胞，該嵌合體小鼠具有含有人肝細胞的嵌合體肝。

7.一種嵌合體小鼠，其特征在于，具有由權(quán)利要求6所述的方法制作的含有人肝細胞的嵌合體肝。

8.一種嵌合體小鼠，其特征在于，其免疫缺陷，以雜合體型具有DNA片段，且具有含有人肝細胞的嵌合體肝，所述DNA片段含有肝特異性啟動子/增強子以及在它們的控制下可驅(qū)動地被連接的編碼尿激酶型纖溶酶原激活劑的cDNA。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的嵌合體小鼠，其中，人肝細胞占嵌合體肝的肝細胞的至少10％。

10.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的嵌合體小鼠，其中，人肝細胞在嵌合體肝中保持其功能和特性至少2周以上。

11.一種對人肝功能產(chǎn)生影響的物質(zhì)的篩選方法，其特征在于，包括以下的(a)～(c)工序：

(a)將被檢物質(zhì)給予到權(quán)利要求7～10中任一項所述的嵌合體小鼠的工序；

(b)對在(a)中給予了該被檢物質(zhì)的該嵌合體小鼠的選自人白蛋白濃度、體重曲線、肝重量體重比、總白蛋白值、總蛋白值、ALT值、AST值和總膽紅素值中的一個以上進行測定的工序；以及

(c)與未給予該被檢物質(zhì)的該嵌合體小鼠的人白蛋白濃度、體重曲線、肝重量體重比、總白蛋白值、總蛋白值、ALT值、AST值、和總膽紅素值進行比較，選擇(b)中測定的人白蛋白濃度、體重曲線、肝重量體重比、總白蛋白值、總蛋白值、ALT值、AST值和總膽紅素值中的任意一個以上產(chǎn)生增減的被檢物質(zhì)的工序。

12.一種評價被檢物質(zhì)對人肝細胞的毒性的方法，其特征在于，包括以下的(a)～(c)工序：

(a)將被檢物質(zhì)給予到權(quán)利要求7～10中任一項所述的嵌合體小鼠的工序；

(b)對在(a)中給予了該被檢物質(zhì)的該嵌合體小鼠的選自人白蛋白濃度、體重曲線、肝重量體重比、總白蛋白值、總蛋白值、ALT值、AST值和總膽紅素值中的一個以上進行測定的工序；以及

(c)與未給予該被檢物質(zhì)的該嵌合體小鼠的人白蛋白濃度、體重曲線、肝重量體重比、總白蛋白值、總蛋白值、ALT值、AST值和總膽紅素值進行比較，將(b)中測定的人白蛋白濃度、體重曲線、肝重量體重比、總白蛋白值、總蛋白值、ALT值、AST值和總膽紅素值中的任意一個以上的增減作為指標，評價該被檢物質(zhì)對人肝細胞的影響的工序。