[發(fā)明專(zhuān)利]乳鐵蛋白融合蛋白及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380021309.2
• 申請(qǐng)日: 2013-04-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104245739B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 佐藤淳;加賀谷伸治
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: NRL制藥股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K19/00
• 分類(lèi)號(hào): C07K19/00;A01H5/00;A01H6/00;A01K67/027;A61K38/16;A61P1/00;A61P1/02;A61P1/10;A61P3/10;A61P9/12;A61P13/02;A61P13/08;A61P15/12;A
• 代理公司: 隆天知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 72003
• 代理人: 張永康;李英艷

本發(fā)明的目的在于，提供一種能夠保留天然乳鐵蛋白的生物活性、顯著延長(zhǎng)在體內(nèi)的壽命、臨床應(yīng)用效果優(yōu)于天然乳鐵蛋白和基因重組型乳鐵蛋白的乳鐵蛋白融合蛋白及其制備方法等。本發(fā)明提供一種融合蛋白或其變異體，其中，該融合蛋白是由含有FcRn結(jié)合區(qū)的蛋白質(zhì)或者肽與乳鐵蛋白或者乳鐵蛋白的生物活性片斷或肽形成的融合蛋白，以(LF?s?Y)n或(Y?s?LF)n來(lái)表示，式中，LF表示乳鐵蛋白或者乳鐵蛋白的生物活性片斷或肽，Y表示含有FcRn結(jié)合區(qū)的蛋白質(zhì)或肽，s表示0～10個(gè)任意的氨基酸的序列，n表示1～10的整數(shù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種具有改良特性的乳鐵蛋白融合蛋白、其用途及其制備方法等。

背景技術(shù)

乳鐵蛋白是主要存在于哺乳動(dòng)物的乳汁也可見(jiàn)于中性粒細(xì)胞、淚液、唾液、鼻液、膽汁、精液等中的分子量約為80000的糖蛋白。乳鐵蛋白從結(jié)合鐵的角度出發(fā)屬于轉(zhuǎn)鐵蛋白家族。作為乳鐵蛋白的生理活性，已知有抗菌作用、鐵代謝調(diào)節(jié)作用、細(xì)胞增殖激活作用、造血作用、抗炎癥作用、抗氧化作用、吞噬作用增強(qiáng)作用、抗病毒作用、雙歧桿菌生長(zhǎng)促進(jìn)作用、抗癌作用、癌轉(zhuǎn)移抑制作用、易位抑制作用等。并且，最近已經(jīng)揭示出乳鐵蛋白具有脂質(zhì)代謝改善作用、鎮(zhèn)痛·抗應(yīng)激作用、抗衰老作用。如此而言，乳鐵蛋白是顯示有多樣化功能的多功能生理活性蛋白質(zhì)，被期望應(yīng)用于醫(yī)藥品、食品等用途方面以達(dá)到恢復(fù)或增進(jìn)健康的目的。目前，含有乳鐵蛋白的食品已經(jīng)上市。

當(dāng)以口服方式攝取乳鐵蛋白時(shí)，乳鐵蛋白會(huì)在胃液中存在的酸性蛋白酶的胃蛋白酶的作用下進(jìn)行水解從而分解成肽，因此，作為乳鐵蛋白分子基本上無(wú)法達(dá)到腸道。但是，已知在消化管中乳鐵蛋白受體存在于小腸粘膜上，最近已經(jīng)確認(rèn)將乳鐵蛋白從腸道內(nèi)攝取于體內(nèi)會(huì)顯示出生物活性。因此，為了發(fā)揮乳鐵蛋白擁有的生物活性，重要的是使乳鐵蛋白以不受到胃液中的胃蛋白酶的水解的狀態(tài)到達(dá)腸道。另外，當(dāng)用作注射劑時(shí)，乳鐵蛋白會(huì)暴露于組織、器官中含有的糜蛋白酶、彈性蛋白酶等蛋白酶的分解作用之下，因此，為了增加在體內(nèi)的給藥組織、器官中的穩(wěn)定性，在實(shí)用中重要的是賦予其針對(duì)這些蛋白酶的抵抗性。

對(duì)于IgG抗體，目前已知其在生物內(nèi)通過(guò)以新生兒Fc受體(neonatal Fcreceptor，下稱(chēng)“FcRn”)為介的再循環(huán)機(jī)制而對(duì)其分解進(jìn)行抑制，因而在血中的半衰期長(zhǎng)。另外，由于抗體藥物的靶標(biāo)受限于特定的蛋白質(zhì)、肽等，作用機(jī)理受到局限，因此認(rèn)為其副作用少于以往的合成化合物。

針對(duì)IgG抗體及使用了其Fc區(qū)的融合蛋白加以利用的生物學(xué)制劑的概念本身，是以往就已經(jīng)知道的，例如，作為對(duì)腎移植后的急性排斥反應(yīng)進(jìn)行抑制的藥物，在1986年以CD3作為靶的抗體藥物就獲得了批準(zhǔn)且得到長(zhǎng)期使用。

但是，通常，融合蛋白通過(guò)融合而影響活性位點(diǎn)，與未融合的蛋白質(zhì)相比，能夠經(jīng)常觀察到生物活性也降低的情況。例如，與內(nèi)源性的TPO相比，TPOR結(jié)合偽肽在與TPOR的結(jié)合量方面并不遜色，但在體外試驗(yàn)中存在生物活性有些低的傾向。

進(jìn)一步地，對(duì)于通過(guò)結(jié)合IFN-α與Fc區(qū)而使IFN-α的血中半衰期增加的融合蛋白而言，存在如下缺點(diǎn)：盡管大幅度增加了血中半衰期，但導(dǎo)致IFN-α的生理活性降低。因此，關(guān)于制備具有所需特性的融合蛋白的條件等，必須針對(duì)各蛋白質(zhì)進(jìn)行充分研究。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專(zhuān)利文獻(xiàn)

專(zhuān)利文獻(xiàn)1：日本特開(kāi)2007-105044號(hào)公報(bào)

專(zhuān)利文獻(xiàn)2：日本特許第4234438號(hào)公報(bào)

專(zhuān)利文獻(xiàn)3：日本特表2011-523351號(hào)公報(bào)

專(zhuān)利文獻(xiàn)4：日本特表2004-521655號(hào)公報(bào)

專(zhuān)利文獻(xiàn)5：美國(guó)專(zhuān)利第5,723,125號(hào)公報(bào)

非專(zhuān)利文獻(xiàn)

非專(zhuān)利文獻(xiàn)1：Jazayeri,J.A.et al.,Biodrugs,22,11-26(2008)