[發明專利]酶檢測裝置

在審

• 申請號: 201380021021.5
• 申請日: 2013-04-22
• 公開（公告）號: CN104487590A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發明（設計）人: 保羅·大衛;凱特·帕克
• 申請（專利權）人: 莫洛克有限公司
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37;G01N33/543;G01N33/573
• 代理公司: 杭州金道專利代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

技術領域

本發明涉及酶檢測裝置，特別的但并不排出的，涉及用于檢測測試樣本中能夠裂解底物的酶活性的裝置。本發明也屬于檢測酶活性的方法，特別的，涉及監測測試樣本中能裂解底物的酶活性的方法，和確定測試樣本中這樣酶的水平或數量的方法。

背景技術

在生命組織中，酶屬于參與催化化學反應的蛋白家族。作為他們的重要或有益的結果，許多情況需要來檢測酶的水平，重要的，酶的活性。

特別的，酶活性的增加已經發現與某些特殊的情況和/或疾病相關。例如，蛋白酶活性的增加與很多癌癥發展的進程相關。從患者體內獲得樣本進行與某種特殊狀況或懷疑具有某種特殊的狀況的酶活性的測試可以被利用作為預測或診斷目的。

在酶族中，有許多類型的酶可以加速底物的裂解。例如，在他們各自的底物中，肽酶或蛋白酶可以催化肽鏈的水解。過去，研究者在某些案例中使用試劑盒或裝置來試圖測量這些類型的活性，這些試劑盒或裝置測量從初始酶底物中釋放的片段或者“脫離的基團”。

基于這樣的原理的分析測試已經在某些案子中被描述，發明者已經描述使用工程底物分子連接到報告半族。通過被檢測的酶對底物的裂解，如果存在，導致所述報告物質的釋放，他可以別被本領域一般技術人員知道的很多技術檢測到。這種檢測在例如US20060003394申請中有描述。

其他一些開發的用于測試酶活性的測試方法是基于酶底物的修飾和非修飾之間的區別。在這方面，WO2009/024805描述了酶檢測裝置，該裝置利用帶有可被檢測的標記的“底物識別分子”(SRM)，其中，在修飾或非修飾狀態中，SRM特異結合到酶底物上。

到目前為止，和這些已有描述檢測有關的問題包括，特別是，使用描述的形式可以取得的準確性。特別的，US2006/0003394描述了一個盒子，其中，酶-底物混合物被施加到層析介質上。當酶不存在的時候，底物-報告物“反應復合物”在上游位置發生固定，當存在酶的時候，反應復合物的裂解倒是報告物向下游流動。因為酶，如果存在，能夠繼續裂解固定在上游位置的反應復合物，通過在任意位置存在的報告物質的任何信號的產生都常常隨著時間而改變，這樣的反應沒有明確的終點。使用這樣分析形式，就會產生嚴重的準確性和數據重現性的問題。

發明內容

考慮到在多種情況中，酶活性的測量是非常有用或有利的，本發明人的目的就是提供或開發一種簡單的，精力充沛的裝置來準確地測量測試樣本中酶的裂解活性。

基于本發明的第一方面，提供用于測試樣本中具有裂解底物的酶的裂解活性存在的酶檢測裝置，該裝置包括：

(i)用于加入測試樣本中的指示分子，該指示分子包括：

(a)裂解位點，如果該酶的裂解活性存在，該裂解位點能夠被所述的酶裂解；

(b)第一捕獲位點；和

(c)包括第二捕獲位點的檢測區域：

其中，裂解位點的裂解導致包括有檢測區域的指示分子的片段的釋放；

(ii)用于接收樣本的第一捕獲區域，其中第一捕獲區域包括能夠結合指示分子的第一捕獲位點的第一捕獲分子，但并不結合包括有檢測區域的指示分子的裂解片段，和其中，通過第一捕獲位點的結合，指示分子被捕獲到第一捕獲分子上從而實質防止任何隨后被該酶引起的裂解位點的裂解；和

(iii)用于接收與第一捕獲區域接觸后的測試樣本的第二捕獲區域，其中第二捕獲區域包括能夠結合指示分子的第二捕獲位點的第二捕獲分子，其中，第二捕獲區域與第一捕獲區域處于空間上的分離；和其中，在檢測區域對通過第二捕獲位點被結合到第二捕獲分子上的任何被裂解的指示分子的檢測，表示測試樣本中酶裂解活性的存在。

在使用的時候，測試樣本首先與第一捕獲區域接觸，其中，通過第一捕獲位點與第一捕獲分子的結合，該指示分子被捕獲，從而實質避免任何后來裂解位點被酶所裂解，和然后，測試樣本與第二捕獲區域接觸，其中，在檢測區域對通過第二捕獲位點被結合到第二捕獲分子上的任何被裂解的指示分子的檢測，表示測試樣本中酶裂解活性的存在。

用于本發明裝置中的測試樣本可以使是任何已知的或懷疑含有酶的材料，也可是從人任何資源獲得的材料。在一些方式中，測試樣本可以從生物資源中獲得，這些生物資源包括血液，唾液，尿液，牛奶，來源于傷口的流體，腹水，腹膜的流體，羊水和其他。在一些優選的方式中，測試樣本為傷口流體和裝置被用來檢測傷口流體中酶的活性，優選的，蛋白酶活性，這樣可以評估傷口恢復的狀態或和速度。在一些方式中，測試樣本為尿液，裝置被用來檢測尿液中酶的活性，特別是蛋白酶的活性。