[發明專利]改進了對革蘭氏陰性細菌的結晶紫?碘復合物的脫色的革蘭氏染色方法

有效

• 申請號: 201380020183.7
• 申請日: 2013-02-22
• 公開（公告）號: CN104245955B
• 公開（公告）日: 2018-03-16
• 發明（設計）人: C.維德納;C.康諾利
• 申請（專利權）人: 文塔納醫療系統公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所11494
• 代理人: 封新琴

技術領域

本公開涉及，為了檢測微生物以及在一些例子中鑒定微生物的目的，而對生物材料進行染色的方法。更具體地，本公開涉及用于在顯微鏡載玻片上實施自動化革蘭氏染色的方法、組合物和試劑盒。

背景

革蘭氏染色是一種公知的、普遍使用的微生物學技術，其用于微生物尤其是細菌的檢測、分類和鑒定。革蘭氏染色的最常見方法涉及四個步驟：染色、捕獲、脫色和復染色。組織學實驗室中常用的革蘭氏染色已知是不穩定的，特別是由于脫色步驟中的波動所致。影響脫色步驟的變量包括溶劑強度、濃度、體積和暴露持續時間。在手動革蘭氏染色過程中，脫色步驟常規使用醇或丙酮，且該步驟僅需數秒。然而，對于自動化染色過程，該脫色過程發生得太快。本公開針對在自動化染色平臺上的革蘭氏染劑脫色的問題。

概述

本文中提供了能自動進行革蘭氏染色的方法、組合物和試劑盒。發明人已鑒定出延長革蘭氏染色脫色步驟的組合物，其允許革蘭氏染色的自動化，例如，使用自動化的和/或計算機執行的染色裝備來實現自動化。

本文中提供了對樣品(如在顯微鏡載玻片上的樣品)進行革蘭氏染色的方法。所述方法可用于檢測和區分革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌。在一些例子中，所公開的革蘭氏染色方法被用于檢測并非細菌的微生物，如酵母(例如假絲酵母(Candida)和隱球酵母(Cryptococcus))。

在具體的例子中，所述方法包括使樣品與慢作用脫色制劑(如一種包含1，2-丙二醇或乙二醇的制劑)在足以從革蘭氏陰性細菌而非革蘭氏陽性細菌顯著除去初級染劑-捕獲劑復合物的條件下接觸。所述樣品是先前與初級染劑(如結晶紫)和捕獲劑(如碘)接觸過的樣品。在具體的例子中，所述方法包括革蘭氏染色過程的一個或多個另外的步驟，如使所述樣品與初級染劑在足以將革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌的細胞壁和細胞膜染色的條件下接觸；使所述樣品與捕獲劑在足以形成初級染劑-捕獲劑復合物的條件下接觸；使所述樣品與復染劑在足以對已脫色的革蘭氏陰性細菌進行染色的條件下接觸，或其組合。

本文還提供能充當慢作用脫色制劑的組合物。在一個例子中，所述組合物包含至少80％的慢作用脫色劑(如1，2-丙二醇或乙二醇)和不超過20％的快作用脫色劑(如0.1-20％的快速作用脫色劑，例如乙醇或丙酮)。這類組合物可用作自動化革蘭氏染色中的慢作用脫色制劑。

本文還提供用于自動化革蘭氏染色的試劑盒。在一個例子中，所述試劑盒在容器中包含慢作用脫色制劑，如包含至少80％或至少90％的慢作用脫色劑(如1，2-丙二醇或乙二醇)和不超過20％的快作用脫色劑(如0.1-20％或1-10％的快速作用脫色劑，例如乙醇或丙酮)的制劑。在一些例子中，試劑盒可另外包含其他組分，如在容器中的一種或多種初級染劑；在容器中的捕獲劑；在容器中的復染劑，顯微鏡載玻片，蓋玻片，其他染劑，和對照載玻片。在具體的例子中，所述容器配置為與自動化革蘭氏染色平臺一起使用。

本公開的前述和其他對象和特征將從下列詳細描述并參照附圖而變得更加明顯。

附圖簡述

圖1是顯示用于自動化革蘭氏染色的例示性方法的流程圖。

詳述

提供對術語和方法的以下解釋以更好地描述本發明及指導本領域普通技術人員實施本發明。除非上下文清楚地另外指示，單數形式“一個”、“一種”和“該”指一種或超過一種。例如，術語“包含一個/一種標本”包括單數或復數標本，且視為等同于短語“包含至少一種標本”。除非上下文清楚地另外指示，術語“或”指所述備選要素中的單個要素或者指兩個或更多個要素的組合。如本文中使用的，“包含”意指“包括”。如此，“包含A或B”意指“包含A、B或A和B”，而不排除別的要素。

除非另外解釋，本文中使用的所有技術和科學術語均具有與本公開所述領域中的普通技術人員普遍理解的相同的含義。在有沖突的情況下，將以包括術語解釋的本說明書為準。微生物學中的常見術語和方法的解釋可見于Wistreich and Lechtman，Laboratory Exercises in Microbiology(微生物學的實驗室手冊)，第6版，1988和Boyd，General Microbiology(微生物學概述)，第2版，1988。