[發(fā)明專利]用于任何聚合酶延伸活性的靈敏的，定量的聚合酶活性檢測和用于確定活細(xì)胞的存在的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380019842.5
• 申請日: 2013-04-12
• 公開（公告）號: CN104520438A
• 公開（公告）日: 2015-04-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖恩·馬克·奧哈拉;丹尼爾·茲威特澤格
• 申請（專利權(quán)）人: 宙斯科技公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京市百倫律師事務(wù)所 11433
• 代理人: 周紅力;陳少麗

1.一種檢測樣本中聚合酶活性的方法，作為包含活性聚合酶的活細(xì)胞或者亞細(xì)胞器存在的指標(biāo)，該方法包括如下步驟：

(a)將樣本中作為聚合酶活性底物的核酸分子與樣本接觸；

(b)在適合聚合酶活性的條件下孵育接觸的樣本；和

(c)根據(jù)活化的聚合酶與底物核酸分子的作用結(jié)果確定核酸分子的存在(和/或定量)，從而指示樣本中活細(xì)胞或亞細(xì)胞器或總聚合酶活性的存在。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中聚合酶是DNA聚合酶。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中聚合酶或者是RNA聚合酶。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中樣本中的活細(xì)胞或者亞細(xì)胞器是完整的活細(xì)胞或者亞細(xì)胞器。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中，在所述完整的活細(xì)胞或者亞細(xì)胞器中，所述核酸聚合酶基因和其翻譯的活性蛋白聚合酶對于活細(xì)胞的存活是必需的，或者，核酸分子能作為聚合酶活性細(xì)胞器的底物。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中作為聚合酶活性底物的核酸分子是固定化的。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中樣本通過差級細(xì)胞裂解制備方法制備，從而使得僅僅來源于活細(xì)胞或者亞細(xì)胞器的聚合酶活性對聚合酶活性的底物進(jìn)行修飾。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中樣本制備自粗細(xì)胞裂解物或純化的細(xì)胞組分。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中該方法進(jìn)一步包括進(jìn)行活細(xì)胞或亞細(xì)胞器基因組或轉(zhuǎn)錄物序列分析的步驟。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中用單一樣本制備物進(jìn)行序列分析。

11.如權(quán)利要求9所述的方法，其中序列分析進(jìn)一步包括具有抗活細(xì)胞或抗亞細(xì)胞器或抗聚合酶活性的檢測試劑，用于診斷和管理患者的病理狀態(tài)。

12.一種包含權(quán)利要求1所述方法中使用到的試劑的分析試劑盒，所述試劑盒用于篩查樣本中是否存在活細(xì)胞或亞細(xì)胞器，并用于提供診斷、預(yù)防或患者管理信息。