[發(fā)明專利]治療血紅蛋白病的組合物和方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380017193.5
• 申請日: 2013-02-22
• 公開（公告）號: CN104284669A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發(fā)明（設計）人: 邁克爾·A·本德爾;馬克·T·格勞迪尼;巴里·L·斯托達德;亮武內
• 申請（專利權）人: 弗雷德哈欽森癌癥研究中心
• 主分類號: A61K38/00
• 分類號: A61K38/00;A61K48/00
• 代理公司: 北京同達信恒知識產(chǎn)權代理有限公司 11291
• 代理人: 黃志華;石磊

1.一種用于治療血紅蛋白病的組合物，包含選自歸巢內切核酸酶(HE)和CRISPR內切核酸酶中的一種或多種內切核酸酶，其中每種所述內切核酸酶結合至選自Bcl11a編碼區(qū)、Bcl11a基因調節(jié)區(qū)、成人β-球蛋白基因座、胎兒血紅蛋白(HbF)沉默區(qū)、Bcl11a-調節(jié)的HbF沉默區(qū)、γ-球蛋白基因啟動子、δ-球蛋白基因啟動子和β-球蛋白基因突變位點中的核苷酸序列。

2.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其中所述內切核酸酶是結合至所述Bcl11a編碼區(qū)或所述Bcl11a基因調節(jié)區(qū)的HE。

3.根據(jù)權利要求2所述的組合物，其中所述HE選自I-HjeMI歸巢內切核酸酶、I-CpaMI歸巢內切核酸酶和I-OnuI歸巢內切核酸酶。

4.根據(jù)權利要求3所述的組合物，其中所述HE是I-HjeMI歸巢內切核酸酶。

5.根據(jù)權利要求4所述的組合物，其中所述I-HjeMI歸巢內切核酸酶包含由SEQ?ID?NO:28或SEQ?ID?NO:29的核苷酸序列編碼的氨基酸序列中的一種或多種氨基酸置換，其中所述氨基酸置換選自Y20、S22、T24、K26、G27、K28、T31、E33、G35、E37、S59、R61、R63、N64、E65、I66、M68、S70、R70、R72、R74、S109、N110、A121、S123、N124、N135、S137、S154、L158、N159、D162、D163、I166、I168、S168、D170、I193、L195、R202、K204和T206。

6.根據(jù)權利要求5所述的組合物，其中所述I-HjeMI歸巢內切核酸酶包含由SEQ?ID?NO:31或SEQ?ID?NO:32的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。

7.根據(jù)權利要求6所述的組合物，其中所述I-HjeMI歸巢內切核酸酶包含SEQ?ID?NO:33的氨基酸序列或其變體，其中所述I-HjeMI歸巢內切核酸酶能夠特異性結合至Bcl11a編碼區(qū)。

8.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其中所述內切核酸酶是CRISPR內切核酸酶，其中所述CRISPR包含RNA引導鏈和Cas9內切核酸酶，其中所述RNA引導鏈介導所述Cas9內切核酸酶與胎兒血紅蛋白(HbF)沉默區(qū)的結合。

9.根據(jù)權利要求8所述的組合物，其中所述RNA引導鏈包含選自SEQ?ID?NO:48、SEQ?ID?NO:49、SEQ?ID?NO:50、SEQ?ID?NO:51、SEQ?ID?NO:52、SEQ?ID?NO:53和SEQ?ID?NO:54中的核苷酸序列。

10.根據(jù)權利要求9所述的組合物，其中所述Cas9內切核酸酶由編碼功能性Cas9內切核酸酶的SEQ?ID?NO:37的核苷酸序列或其變體編碼。

11.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其中所述內切核酸酶是能夠特異性結合至胎兒血紅蛋白(HbF)沉默區(qū)的HE。

12.根據(jù)權利要求11所述的組合物，其中所述HE選自I-HjeMI歸巢內切核酸酶、I-CpaMI歸巢內切核酸酶和I-OnuI歸巢內切核酸酶。

13.根據(jù)權利要求12所述的組合物，其中所述HE是I-OnuI歸巢內切核酸酶。

14.根據(jù)權利要求13所述的組合物，其中所述I-OnuI歸巢內切核酸酶包含編碼I-OnuI歸巢內切核酸酶的SEQ?ID?NO:34的核苷酸序列的變體編碼的氨基酸序列，所述I-OnuI歸巢內切核酸酶能夠特異性結合至所述胎兒血紅蛋白(HbF)沉默區(qū)。

15.根據(jù)權利要求14所述的組合物，其中所述I-OnuI歸巢內切核酸酶包含由SEQ?ID?NO:34核苷酸序列編碼的氨基酸序列中的一種或多種氨基酸置換，其中所述氨基酸置換選自L26、R28、R30、N32、S40、E42、G44、Q46、A70、S72、S78、K80和T82。

16.根據(jù)權利要求15所述的組合物，其中所述I-OnuI歸巢內切核酸酶包含由SEQ?ID?NO:34的核苷酸序列編碼的氨基酸序列中的一種或多種氨基酸置換，其中所述氨基酸置換選自F182、N184、I186、S190、K191、Q197、V199、S201、K225、K227、D236、V238和T240。