[發(fā)明專利]用于預(yù)防和治療感染的益生菌來源的無活力的材料

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380015996.7
• 申請日: 2013-03-18
• 公開（公告）號: CN104219968A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: E.A.F.范托爾;G.格羅斯;M.布拉克斯馬;K.M.奧弗坎普;E.K.佩爾斯
• 申請（專利權(quán)）人: MJN美國控股有限責(zé)任公司
• 主分類號: A23L1/30
• 分類號: A23L1/30;A61K35/74;C12R1/225
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 黃登高;孟慧嵐

技術(shù)領(lǐng)域

本公開內(nèi)容涉及自益生細(xì)菌菌株、尤其是自鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus?rhamnosus?Goldin?Gorbach,?LGG)收獲無活力的、生物活性材料的方法。具體地講，本公開內(nèi)容涉及對細(xì)菌感染具有活性的益生菌(probiotic)來源的材料的制備方法，可由所公開的收獲方法獲得的益生菌材料，以及涉及包含益生菌來源的材料的飲食或營養(yǎng)產(chǎn)品。

背景技術(shù)

阪崎腸桿菌(Cronobacter?sakazakii，以前稱為Enterobacter?sakazakii)是一種與在嬰兒、尤其是新生兒重癥監(jiān)護(hù)室中的感染暴發(fā)相關(guān)的條件致病菌。在嬰兒中，它可引起菌血癥、腦膜炎和壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)。由該生物感染所致的嬰兒死亡率經(jīng)報告為40-80%。作為細(xì)菌侵入腦部的結(jié)果，感染經(jīng)常導(dǎo)致發(fā)育遲緩和認(rèn)知功能受損。多達(dá)20%存活新生兒出現(xiàn)嚴(yán)重的神經(jīng)學(xué)并發(fā)癥。

因此需要提供一種組合物，其針對阪崎腸桿菌等病原體感染具有防護(hù)作用或可治療所述感染。本公開內(nèi)容提供組合物，其在新生大鼠模型中對阪崎腸桿菌等病原體向腦部的侵入和死亡率有作用。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，LGG培養(yǎng)上清液減少阪崎腸桿菌向腦和肝的侵入并且甚至完全抑制幼小大鼠的阪崎腸桿菌相關(guān)死亡率。

關(guān)于這一點，已經(jīng)體外測試了多種化合物對阪崎腸桿菌的細(xì)菌粘附或生長的抑制性能。例如，已經(jīng)證明，在細(xì)胞培養(yǎng)中，益生元寡糖(prebiotic?oligosaccharide)抑制阪崎腸桿菌向上皮細(xì)胞的粘附(Quintero等人,?Curr.?Microbiol.?62(5):1448-54)。在擴(kuò)散測定中，已經(jīng)描述了由嗜酸乳桿菌(Lactobacillus?acidophilus)產(chǎn)生的酪蛋白來源的抗微生物肽發(fā)揮針對阪崎腸桿菌和大腸桿菌(E.?coli)的抗細(xì)菌活性(Hayes等人,?2006?Appl.?Environ.?Microbiol.?第72卷，第3期；2260-2264)。Collado等人(2008?FEMS?Microbiol?Lett?285?58-64)測試了益生菌菌株阻礙阪崎腸桿菌向分離的人粘液的粘附(在該研究中不包含LGG)。糖醛酸糖已用于在培養(yǎng)基中抑制阪崎腸桿菌生長(WO2009/148312)。總之，許多這些化合物與LGG上清液材料相比具有非常不同的特性和組成。此外，已經(jīng)在體外測試了所有這些物質(zhì)并集中在促成感染的發(fā)展(例如在培養(yǎng)基中抑制細(xì)菌生長或抑制細(xì)菌粘附到上皮細(xì)胞)的所選方面。盡管細(xì)菌粘附和生長等方面可促成感染的發(fā)展，但是這些體外測定并不能完全預(yù)測在體內(nèi)對感染的系統(tǒng)下游參數(shù)和臨床終點的影響。除了保加利亞乳桿菌(L.?bulgaricus)(以下詳細(xì)說明)之外，并未在體內(nèi)測試上述物質(zhì)，因此，迄今為止并未證明可在體內(nèi)實現(xiàn)所提出的防護(hù)作用。

關(guān)于益生菌或其上清液，這些已被證明在體外能阻止病原體(包括阪崎腸桿菌)向上皮細(xì)胞或人粘液的粘附或者在體外抑制病原體生長。例如，Sherman等人(Infect.?Immun.?2005?5183-5188)已經(jīng)證明益生菌在體外在T84上皮細(xì)胞中減少了EHEC和ETEC誘導(dǎo)的變化，但是培養(yǎng)上清液和經(jīng)處理的(tyndallized)細(xì)菌(經(jīng)受熱處理或γ輻射)則沒有相應(yīng)作用。Hudeault等人(Appl.?Environ.?Microbiol?1997?513-518)已經(jīng)證明，乳桿菌GG?(LGG)及其耗盡的培養(yǎng)上清液這兩者在體外都減少了鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella?typhimurium)侵入，盡管是在較小的程度上。在體內(nèi)，在相應(yīng)的鼠傷寒沙門氏菌感染的小鼠模型中，僅測試了活的LGG微生物。De?Keersmaecker等人(FEMS?Microbiol?Lett?2006?259?89-96)表征了LGG上清液在體外針對鼠傷寒沙門氏菌的抗微生物活性。EP1384483公開了已感染旋毛蟲(Trichinella?spiralis)并用乳酸雙歧桿菌(Bifidobacterium?lactis)治療的小鼠與用培養(yǎng)基MRS治療的小鼠相比具有較低的蟲計數(shù)。此外，其它益生菌菌株例如嗜酸乳桿菌具有不同作用和增加或不影響蟲載量。重要的是，來自其它病原體研究的發(fā)現(xiàn)不能自動轉(zhuǎn)化為阪崎腸桿菌，因為發(fā)病機(jī)制明顯不同。更具體地講，阪崎腸桿菌可以侵入腦部并引起腦損傷，這對于最常見的胃腸道感染并非是這種情況。