[發(fā)明專利]綴合的聚合物顆粒及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380013658.X
• 申請(qǐng)日: 2013-02-08
• 公開（公告）號(hào): CN104302783A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: S.曼欽;A.布蘭查德;L.安德魯茲;S.坎;D.格雷姆亞欽斯基;A.盧伊;C.斯托拉克澤克;T.索科爾斯基
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 生命技術(shù)公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105
• 代理人: 沈斌

本專利申請(qǐng)要求于2012年2月9日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/597,064的利益，所述美國臨時(shí)申請(qǐng)以引用的方式全文并入本文。

技術(shù)領(lǐng)域

本公開內(nèi)容總地涉及使底物綴合的方法和通過此類方法形成的底物。

背景技術(shù)

多核苷酸與底物的綴合已變成多種工業(yè)的關(guān)注點(diǎn)。包括綴合的多核苷酸的底物可用于分離技術(shù)、遺傳標(biāo)記物檢測(cè)和測(cè)序中。

例如，與多核苷酸探針綴合的底物可用于捕獲遺傳標(biāo)記物以便檢測(cè)。示例性遺傳標(biāo)記物可與基因內(nèi)的疾病變體、引起疾病的細(xì)菌或病毒、或可用于人體鑒定的等位基因有關(guān)。包括與遺傳標(biāo)記物互補(bǔ)的綴合探針的底物可捕獲此類遺傳標(biāo)記物，且多種技術(shù)可用于檢測(cè)捕獲的遺傳標(biāo)記物的存在。

在另一個(gè)例子中，與多核苷酸綴合的底物可用于捕獲并分離遺傳材料。在一個(gè)例子中，在底物上的探針可與所需多核苷酸互補(bǔ)。探針可構(gòu)造為捕獲所需多核苷酸且之后釋放多核苷酸，以允許多核苷酸的回收。在另一個(gè)例子中，與多核苷酸探針綴合的聚合物顆粒可用于從溶液中捕獲并分離靶多核苷酸，所述多核苷酸探針與靶多核苷酸互補(bǔ)。隨后，靶多核苷酸可在不同溶液中從綴合顆粒中釋放。

在進(jìn)一步例子中，與多核苷酸綴合的底物可用于多種測(cè)序技術(shù)中。例如，與多核苷酸或多核苷酸的多個(gè)拷貝綴合的聚合物顆粒可用于測(cè)序技術(shù)，例如基于熒光的測(cè)序技術(shù)或基于離子的測(cè)序技術(shù)中。

雖然綴合底物的上述用途各自對(duì)于多種工業(yè)是特別有利的，但多核苷酸與底物例如聚合物底物的可靠綴合通常是低效的。此類低效導(dǎo)致較低密度的綴合的多核苷酸或缺乏所需多核苷酸的隨機(jī)區(qū)域。此類低效可導(dǎo)致弱分離、檢測(cè)方法中的低精確度、以及測(cè)序技術(shù)中的低信號(hào)或高信噪比。

因此，改良的綴合方法將是希望的。

發(fā)明內(nèi)容

在第一個(gè)方面，使底物綴合的方法包括使與生物分子結(jié)合的抗衡離子與親脂抗衡離子交換，以形成生物分子復(fù)合物，將生物分子復(fù)合物分散在非水性溶劑中，并且在非水性溶劑的存在下使生物分子復(fù)合物與底物偶聯(lián)。

在第二個(gè)方面，使聚合物顆粒綴合的方法包括使與多核苷酸結(jié)合的陽離子抗衡離子與親脂陽離子抗衡離子交換，以形成多核苷酸復(fù)合物，該多核苷酸包括親核或親電反應(yīng)基團(tuán)。該方法還包括將多核苷酸復(fù)合物分散在非反應(yīng)性、非水性溶劑中，并且通過親核或親電取代使多核苷酸與聚合物顆粒偶聯(lián)，該聚合物顆粒包括親電基團(tuán)或親核基團(tuán)。

在第三個(gè)方面，聚合物顆粒包括使用上述方面或例子中的任一種的方法與多核苷酸綴合的聚合物。

在第四個(gè)方面，測(cè)序方法包括在寡核苷酸綴合的聚合物顆粒的存在下，擴(kuò)增靶多核苷酸以形成多核苷酸綴合的聚合物顆粒。寡核苷酸至少部分與靶多核苷酸互補(bǔ)。寡核苷酸綴合的聚合物顆粒通過上述方面或例子中的任一種的方法形成。該方法還包括將多核苷酸綴合的聚合物顆粒應(yīng)用于測(cè)序裝置，將引物應(yīng)用于多核苷酸綴合的聚合物顆粒，摻入核苷酸并檢測(cè)摻入。

在第五個(gè)方面，分離靶多核苷酸的方法包括使含有靶多核苷酸的第一溶液與探針綴合的底物接觸。探針綴合的底物的探針至少部分與靶多核苷酸互補(bǔ)。探針綴合的底物通過上述方面或例子中的任一種的方法形成。該方法還包括在靶多核苷酸與探針偶聯(lián)的同時(shí)洗滌探針綴合的底物，并且在第二溶液中釋放靶多核苷酸。

在另外一個(gè)方面，使寡核苷酸與聚合物綴合的方法包括用雙NHS酯或二琥珀酰亞胺基碳酸酯處理包含胺官能團(tuán)的聚合物，以形成官能化的聚合物，并且用胺封端的寡核苷酸處理官能化的聚合物，以形成包括寡核苷酸的綴合的聚合物。

附圖說明

通過參考附圖，本公開內(nèi)容可得到更好理解，并且它的多個(gè)特征和優(yōu)點(diǎn)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員變得顯而易見。

圖1包括用于處理多核苷酸的示例性方法的舉例說明。

圖2包括示例性綴合方法的舉例說明。

圖3包括示例性測(cè)序方法的舉例說明。

圖4包括示例性直接綴合方法的舉例說明。

圖5包括示例性間接綴合方法的舉例說明。

圖6包括示例性綴合方法的舉例說明。

在不同附圖中的相同參考符號(hào)的使用指示相似或相同項(xiàng)。

具體實(shí)施方式