[發(fā)明專利]綴合的聚合物顆粒及其制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201380013658.X
• 申請日: 2013-02-08
• 公開（公告）號: CN104302783A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發(fā)明（設計）人: S.曼欽;A.布蘭查德;L.安德魯茲;S.坎;D.格雷姆亞欽斯基;A.盧伊;C.斯托拉克澤克;T.索科爾斯基
• 申請（專利權）人: 生命技術公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 沈斌

1.一種使底物綴合的方法，所述方法包括：

使與生物分子結合的抗衡離子與親脂抗衡離子交換，以形成生物分子復合物；

將所述生物分子復合物分散在非水性溶劑中；和

在所述非水性溶劑的存在下使所述生物分子復合物與底物偶聯(lián)。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述生物分子是多核苷酸。

3.根據權利要求1或權利要求2所述的方法，其中所述親脂抗衡離子是親脂銨離子、親脂磷鎓離子、親脂砷離子、親脂硫鎓離子，或其組合。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述親脂銨離子是四烷基銨、四芳基銨、混合的烷基和芳基銨，或其組合。

5.根據權利要求4所述的方法，其中所述親脂銨離子選自四甲基銨、四乙基銨、四丙基銨、四丁基銨、四戊基銨、四己基銨、四庚基銨、四辛基銨、其烷基和芳基混合物，及其組合。

6.根據權利要求3所述的方法，其中所述親脂磷鎓離子是四苯基磷鎓。

7.根據權利要求3所述的方法，其中所述親脂砷離子是四烷基砷、四芳基砷、混合的烷基和芳基砷離子，或其組合。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述親脂砷離子是四苯基砷。

9.根據權利要求3所述的方法，其中所述親脂硫鎓離子是三烷基硫鎓離子。

10.根據權利要求1-9中任一項所述的方法，其中所述非水性溶劑是不與所述底物和所述生物分子上的偶聯(lián)基團反應的。

11.根據權利要求1-10中任一項所述的方法，其中所述非水性溶劑是極性的。

12.根據權利要求1-11中任一項所述的方法，其中所述非水性溶劑是酰胺、脲、碳酸酯、醚、亞砜、砜、受阻醇，或其組合。

13.根據權利要求12所述的方法，其中所述酰胺或脲選自甲酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、乙酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、六甲基磷酰胺、吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷酮、N,N,N’,N’-四甲基脲、N,N’-二甲基-N,N’-三亞甲基脲，及其組合。

14.根據權利要求12所述的方法，其中所述碳酸酯選自碳酸二甲酯、碳酸亞丙基酯，及其組合。

15.根據權利要求12所述的方法，其中所述醚是四氫呋喃。

16.根據權利要求12所述的方法，其中所述亞砜或砜選自二甲基亞砜、二甲基砜，及其組合。

17.根據權利要求12所述的方法，其中所述受阻醇包括叔丁醇。

18.根據權利要求1-17中任一項所述的方法，其中所述底物包括聚合物顆粒。

19.根據權利要求1-18中任一項所述的方法，其中所述聚合物顆粒包括可與所述生物分子包括的反應基團反應的偶聯(lián)基團。

20.根據權利要求1-19中任一項所述的方法，其中所述偶聯(lián)基團包括親核體或親電體之一，并且所述反應配偶體包括所述親核體或所述親電體中的另一個。

21.一種使聚合物顆粒綴合的方法，所述方法包括：

使與多核苷酸結合的陽離子抗衡離子與親脂陽離子抗衡離子交換，以形成多核苷酸復合物，所述多核苷酸包括親核或親電反應基團；

將所述多核苷酸復合物分散在非反應性、非水性溶劑中；和

通過親核或親電取代使所述多核苷酸與所述聚合物顆粒偶聯(lián)，所述聚合物顆粒包括親電基團或親核基團。

22.一種聚合物顆粒，所述聚合物顆粒包含使用根據權利要求1-21中任一項所述的方法與多核苷酸綴合的聚合物。

23.一種測序方法，所述方法包括：

在寡核苷酸綴合的聚合物顆粒的存在下，擴增靶多核苷酸以形成多核苷酸綴合的聚合物顆粒，所述寡核苷酸至少部分與所述靶多核苷酸互補，所述寡核苷酸綴合的聚合物顆粒通過根據權利要求1-21中任一項所述的方法形成；

將所述多核苷酸綴合的聚合物顆粒應用于測序裝置；

將引物應用于所述多核苷酸綴合的聚合物顆粒；

摻入核苷酸；和

檢測所述摻入。