[發明專利]功能性核酸分子的構建方法和該方法中使用的核酸組合物

有效

• 申請號: 201380012229.0
• 申請日: 2013-03-01
• 公開（公告）號: CN104169422B
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 阿部洋;伊藤嘉浩;丸山豪斗
• 申請（專利權）人: 國立研究開發法人科學技術振興機構
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/09;C40B40/02
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司11021
• 代理人: 蔣亭

技術領域

本發明涉及在細胞內構建功能性核酸分子的新方法以及該方法中使用的核酸組合物。

背景技術

人們所知道的是，在核酸分子中，存在著盡管不編碼蛋白質，但是在各種生命現象中起著重要作用的物質。作為這種核酸分子，可以列舉，例如功能性的非編碼RNA分子(非專利文獻1)、和引起RNA干擾作用的小分子RNA(非專利文獻2)等。

例如，RNA干擾作用，作為在細胞內，特異性地抑制目的RNA的作用的重要技術(非專利文獻3)，原先作為試劑，現在作為藥物的應用(非專利文獻4)也被積極地進行研究。

現有技術文獻

非專利文獻

非專利文獻1:Ryan J Taft,Ken C Pang,Timothy R Mercer,Marcel Dinger1 and John S Mattick,J Pathol.,2010,220,126-139.

非專利文獻2:Fire A,XuS,Montgomery M,Kostas S,Driver S,Mello C；Nature,1998,391,806-11.

非專利文獻3:Sayda M.Elbashir,Javier Martinez,Agnieszka Patkaniowska,Winfried Lendeckel and Thomas Tuschl；EMBO J.2001,20,6877-6888.

非專利文獻4:John C.Burnett,John J.Rossi and Katrin Tiemann；Biotechnol.J.2011,6,1130-1146.

發明內容

發明要解決的問題

盡管引起RNA干擾作用的RNA是小分子，但為了最大限度誘導其效果，存在著使其細胞膜透過性進一步提高的需求，以及抑制由于活化免疫系統導致的毒性表達的進一步的需求。

然而，面對這樣的需求，目前的現狀只不過是，為了使RNA分子成為更小的分子，而努力引入發揮其功能所需要的最小限度的序列。

本發明正是鑒于上述問題而產生的，本發明的目的在于提供以容易進入細胞的形態將功能性核酸分子導入到細胞內，構建細胞內的功能性核酸分子的方法等。

用于解決問題的手段

為了解決上述問題，本發明提供一種由1條或2條核酸鏈構成的功能性核酸分子的構建方法，該方法包括：在細胞內導入在對應末端添加了通過化學反應將會相互結合的官能團對的2個以上片段的工序，和在上述細胞內使上述官能團之間發生反應，從而使片段之間結合，生成由1條或2條核酸鏈構成的功能性核酸分子的生成工序。

本發明還提供一種功能性核酸分子的構建用核酸組合物，該組合物是上述方法中使用的核酸組合物，其具有構成功能性核酸分子的上述核酸鏈，且該核酸鏈中的至少一條含有在對應末端添加了通過化學反應將會相互結合的官能團對的2個以上片段。

發明的效果

功能性核酸分子，作為容易進入細胞的多個片段導入到細胞內，能夠構建出在細胞內的功能性核酸分子。

附圖說明

[圖1]是表示本發明所涉及方法的一個實施方式的概要圖。

[圖2]是表示實施例中使用的各種RNA的序列的圖。

[圖3]是表示實施例中體外連結(ligation)結果的圖。

[圖4]是表示實施例中熒光素酶基因表達結果的圖。

[圖5]是表示實施例中熒光素酶基因表達結果的圖。

[圖6]是表示實施例中免疫應答測定結果的圖。

具體實施方式

〔1.功能性核酸分子的構建方法〕

(構建方法的概要)

本發明所涉及的功能性核酸分子的構建方法是由1條或2條核酸鏈構成的功能性核酸分子的構建方法，其包括以下的工序1)和2)。

1)在細胞內導入在對應末端添加了通過化學反應將會相互結合的官能團對的2個以上片段的工序、

2)在上述細胞內使上述官能團之間發生反應，從而使片段之間結合，生成由1條或2條核酸鏈構成的功能性核酸分子的生成工序。

也就是說，本發明所涉及的功能性核酸分子的構建方法是1條或2條核酸鏈構成的功能性核酸分子的構建方法，其包括以下的工序1)和2)：