[發明專利]功能性核酸分子的構建方法和該方法中使用的核酸組合物

有效

• 申請號: 201380012229.0
• 申請日: 2013-03-01
• 公開（公告）號: CN104169422B
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 阿部洋;伊藤嘉浩;丸山豪斗
• 申請（專利權）人: 國立研究開發法人科學技術振興機構
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/09;C40B40/02
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司11021
• 代理人: 蔣亭

1.非疾病的診斷和治療用的在細胞內構建功能性核酸分子的方法，其包括：

在細胞內導入在對應末端添加了通過細胞內化學反應將會相互結合的官能團對的2個以上片段的導入工序，以及

在所述細胞內使所述官能團之間發生反應，從而使片段之間結合，生成所述功能性核酸分子的生成工序，

所述通過細胞內化學反應將會相互結合的官能團對是親電子基團和被保護基保護的親核基團的組合，

所述保護基通過所述細胞中的內源性物質或光照射而脫離。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述功能性核酸分子具有在同一核酸鏈內雜交的雜交區域、或在不同的核酸鏈間雜交而形成的雜交區域，

所述片段之間的所述結合發生在所述雜交區域。

3.根據權利要求2所述的方法，其中，所述功能性核酸分子由第一核酸鏈和第二核酸鏈這兩條核酸鏈構成，具有在該兩條核酸鏈間雜交而形成的雜交區域，

所述兩條核酸鏈均作為在對應末端添加了通過細胞內化學反應將會相互結合的官能團對的2個片段被導入到細胞內，

構成所述第一核酸鏈的片段之間的結合和構成所述第二核酸鏈的片段之間的結合發生在所述雜交區域的不同位置。

4.根據權利要求1～3中任一項所述的方法，其中，所述親核基團是硫代磷酸酯基。

5.根據權利要求1～3中任一項所述的方法，其中，所述保護基為下述(a)～(k)中的任意一種，

在所述式中，R、R’和R”表示取代或非取代的烷基或芳基，

R₁和R₂彼此獨立地表示氫原子或碳數為1～4的烷基，

n表示1～3的整數，

當n為2或3時，具有的n個R₁任選彼此不同，具有的n個R₂任選彼此不同，

(a)、(b)、(e)、(g)、(h)、(i)、(j)和(k)中的苯環上的多個氫原子彼此獨立地任選被取代基取代。

6.根據權利要求1～3中任一項所述的方法，其中，所述親電子基團是碘乙酰基、溴乙酰基或碘基。

7.非疾病的診斷和治療用的在細胞內構建siRNA的方法，其包括：

在細胞內導入構成該siRNA的第一RNA鏈和第二RNA鏈的至少之一作為在對應末端添加了通過細胞內化學反應將會相互結合的官能團對的2個以上片段的導入工序，以及

在所述細胞內使所述官能團之間發生反應，從而使片段之間結合，生成所述siRNA的生成工序，其中，

所述siRNA的長度為20～35mer，

所述通過細胞內化學反應將會相互結合的官能團對是親電子基團和被保護基保護的親核基團的組合，

所述保護基通過所述細胞中的內源性物質或光照射而脫離。

8.根據權利要求7所述的方法，其中，所述siRNA的所述第一RNA鏈和所述第二RNA鏈具有形成兩條鏈的雜交區域，

所述片段之間的所述結合發生在所述雜交區域。

9.根據權利要求8所述的方法，其中，所述第一RNA鏈和所述第二RNA鏈均作為在對應末端添加了通過細胞內化學反應將會相互結合的官能團對的2個以上片段被導入到細胞內，

構成所述第一RNA鏈的片段之間的結合和構成所述第二RNA鏈的片段之間的結合發生在所述雜交區域的不同位置。

10.根據權利要求7～9中任一項所述的方法，其中，所述親核基團是硫代磷酸酯基。

11.根據權利要求7～9中任一項所述的方法，其中，所述保護基為下述(a)～(k)中的任意一種，

在所述式中，R、R’和R”表示取代或非取代的烷基或芳基，

R₁和R₂彼此獨立地表示氫原子或碳數為1～4的烷基，

n表示1～3的整數，

當n為2或3時，具有的n個R₁任選彼此不同，具有的n個R₂任選彼此不同，

(a)、(b)、(e)、(g)、(h)、(i)、(j)和(k)中的苯環上的多個氫原子彼此獨立地任選被取代基取代。

12.根據權利要求7～9中任一項所述的方法，其中，所述親電子基團是碘乙酰基、溴乙酰基或碘基。