[發明專利]體外制備人工牙齒原基的方法和由其獲得的人工牙齒原基

有效

• 申請號: 201380011350.1
• 申請日: 2013-02-20
• 公開（公告）號: CN104271167B
• 公開（公告）日: 2016-10-26
• 發明（設計）人: 羅蘭·勞斯特爾;烏韋·馬爾克斯;詹尼弗·賓德;馬克·羅索夫斯基
• 申請（專利權）人: 羅蘭·勞斯特爾;烏韋·馬爾克斯;詹尼弗·賓德;馬克·羅索夫斯基
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 浦彩華;武晨燕

背景技術

牙科護理是維持健康義齒的最佳方式。然而，即使在最佳牙科護理下，也可發生牙齒的損害、破壞或缺失。所述牙齒的損害、破壞或缺失可能為例如疾病相關的、激素相關的、療法相關的或意外事件的后果。現今，在此類情況下使用牙科植入體，這些牙科植入體通常由包含金屬(例如鈦)、陶瓷和/或復合物的材料形成。這些植入技術是高度復雜的且由醫學和化妝品觀點，已經達到高水平。然而，這些牙齒替換療法需要一個重要的外科手術，且最終，需要辛苦的隨訪護理。另外，這些合成植入體無法滿足對于牙齒的所有需求，如例如由將牙齒固定于頷骨內的天然牙周韌帶“吸收”。

因此，在再生醫學領域內的一個目的是提供允許生產或誘導在功能和形態方面等于對應的天然存在組織和器官的組織或器官的手段。一種方法是提供可體外和/或體內用于牙齒再生的人工組織或器官。所述人工組織包含已經通過生物技術手段生產的組織。

除了提供能夠體內形成在功能和形態方面充分等于天然存在牙齒的牙齒的組織的問題以外，另一目標是提供無需胚胎干細胞即可制造且利用源于待治療的患者的細胞的組織。

在眾多方法中，已經針對用于這種目的的組織進行首次嘗試且取得進展。此類方法的實例描述于EP?1?905?459?A1、EP?2?130?909?A1、US?2007/0231275A1、US?2011/0212414以及WO?2005/051436A2中。然而，在大多數的這些方法中，使用胚胎細胞，這些細胞在非生理學貼壁培養(adherent?culture)條件下進行培養且需要合成支架或載體的存在。

因此，本發明的一種選擇是提供克服現有技術的一種或多種問題的手段。具體來說，本發明的一種選擇是提供體外制備人工牙齒原基的改良的方法，該方法可用非胚胎原代細胞來執行。

發明內容

本發明涉及一種體外制備人工牙齒原基的方法，包括以下步驟：

a)提供分離的間充質牙髓細胞；和

b)在非貼壁條件下培養這些間充質牙髓細胞以形成代表人工牙齒原基的細胞聚集體。

已驚訝地發現，分離的間充質牙髓細胞能夠形成代表人工牙齒原基的三維細胞聚集體，而不影響胚胎上皮細胞。這種效應是通過在非貼壁條件下培養間充質牙髓細胞來達成的。可能展示，在所述非貼壁培養條件下，這些間充質牙髓細胞自由地彼此安排且凝結成細胞聚集體，該聚集體展現牙胚結構的特異性標志物的表達且因此表示牙齒原基。

在下文中，更詳細地提供本發明的不同方面。除非清楚地作相反陳述，否則如此定義的各方面可以與任何一個或多個其他方面組合。具體來說，被指示為優選或有利的任何特征均可以與被指示為本發明的一部分或被指示為優選或有利的任何一個或多個其他特征組合。

本發明的方法是針對體外人工牙齒原基的制備。人工牙齒原基為已經重新且體外制備且組裝的牙齒原基。

出于本發明的目的，術語“牙齒原基”是指展現牙齒組織或功能性牙胚所特有的至少一種功能的一種或超過一種細胞類型的功能性細胞聚集體。優選地，本發明的牙齒原基展現牙齒組織或功能性牙胚或牙齒的大多數或基本上所有的器官或組織功能。具體來說，本發明的牙齒原基可以表現得像功能性誘導性牙胚一樣且能夠體外和/或體內誘導牙齒器官發育或完整牙齒的發育。本發明的牙齒原基的特征可以在于與牙齒組織的發育或分化有關的標志基因或蛋白質的增強的表達。優選地，本發明的牙齒原基的特征可以在于與即將經受非貼壁培養條件之前的分離的間充質牙髓細胞相比，BMP4、HGF、PAX9、MSX1、I型膠原蛋白、DSPP和/或原牙質(predentin)的增強的表達。此外，在聚集體中可能出現基底膜(basement?membrane)形成，特征主要在于IV型膠原蛋白表達。聚集體形成和培養條件可能導致所得組織的礦化(mineralization)。