[發(fā)明專利]新穎的抗原的檢測(cè)方法及利用該檢測(cè)方法的裝置

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380010090.6
• 申請(qǐng)日: 2013-02-20
• 公開（公告）號(hào): CN104126121B
• 公開（公告）日: 2017-02-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭燦一;李昌燮;黃正九;丁鐘植
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 納諾恩科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/53
• 分類號(hào): G01N33/53;G01N33/532;G01N33/543;G01N33/574
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所11038
• 代理人: 羅菊華

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及新穎的抗原的檢測(cè)方法及利用該檢測(cè)方法的裝置。

【背景技術(shù)】

開發(fā)不僅能夠迅速簡(jiǎn)單測(cè)定復(fù)雜的試樣中的分析對(duì)象(例如，抗原)，且測(cè)定值的可靠性高的抗原檢測(cè)方法的重要性越來越大。例如，在醫(yī)院的緊急情況下，臨床診斷的要點(diǎn)為不熟練的技師實(shí)施復(fù)雜的化學(xué)或免疫化學(xué)分析方法，來迅速準(zhǔn)確地測(cè)定患者的狀態(tài)。這種化驗(yàn)通常由作為臨床化學(xué)家未受過訓(xùn)練的醫(yī)院的工作人員或護(hù)士實(shí)施。就向醫(yī)院的化驗(yàn)室移送血液試樣并實(shí)施分析的當(dāng)前的臨床診斷系統(tǒng)而言，在需要迅速的化驗(yàn)結(jié)果的情況下，不妥當(dāng)。因此，需要能夠在短時(shí)間內(nèi)獲得分析結(jié)果，且利用醫(yī)院的診斷系統(tǒng)來實(shí)施化驗(yàn)的職員及裝置符合上述要求的測(cè)定方法。

作為現(xiàn)有的抗原的測(cè)定方法，主要利用免疫檢測(cè)(immunoassay)。尤其，當(dāng)檢查腫瘤標(biāo)記物的項(xiàng)目時(shí)，大部分利用免疫檢測(cè)(immunoassay)。免疫檢測(cè)作為利用抗原抗體反應(yīng)的檢測(cè)，能夠利用選擇性地與要測(cè)定的物質(zhì)相結(jié)合的抗體來測(cè)定所需的物質(zhì)。代表性的免疫檢測(cè)的種類和原理如下。雖然按不同器官使用的方法和具體的反應(yīng)條件有所差異，但基本原理幾乎相同。

凝集法(顆粒免疫檢測(cè)，particle?immunoassay)利用因抗原和抗體的結(jié)合而發(fā)生凝集反應(yīng)(agglutination)的情況。大致測(cè)定如下情況，即，在紅細(xì)胞或乳膠(latex)、明膠(gelatin)等附著抗原或抗體，當(dāng)該粒子反應(yīng)時(shí)，表示凝集。在凝集測(cè)定中，能夠利用濁度測(cè)定法(turidimetry)來測(cè)定光的吸收程度，或者利用比濁法(nephelometry)來測(cè)定光的散射程度。

酶免疫測(cè)定法(EIA，enzyme?immunoassay)利用酶反應(yīng)(enzyme?reaction)來測(cè)定抗原和抗體的結(jié)合。大部分預(yù)先在與要測(cè)定的物質(zhì)相結(jié)合的抗體附著酶，并發(fā)生抗原抗體反應(yīng)。之后，若放入與結(jié)合的酶反應(yīng)的底物，則發(fā)生酶反應(yīng)。通常利用的酶有堿性磷酸酶(alkaline?phosphatase)、辣根過氧化物酶(horseradish?peroxidase)、β半乳糖苷酶(β-galactosidase)等。酶反應(yīng)的產(chǎn)物大部分為帶色物質(zhì)，利用分光光度計(jì)(spectrophotometer)來測(cè)定這些帶色物質(zhì)。

在放射免疫測(cè)定法中，利用放射性同位素(radioisotope)來測(cè)定抗原和抗體的結(jié)合。放射性同位素指在物理方面不穩(wěn)定，且自然發(fā)生衰變(放射性衰變，radioactive?decay)而轉(zhuǎn)換為穩(wěn)定的物質(zhì)，在此過程中，放出放射線的物質(zhì)。在要測(cè)定的物質(zhì)之類的物質(zhì)附著放射性同位素，或者在與要測(cè)定的物質(zhì)反應(yīng)的抗體附著放射性同位素，從而發(fā)生抗原抗體反應(yīng)。在反應(yīng)結(jié)束后，能夠測(cè)定從反應(yīng)物放出的放射線的量，并計(jì)算出所需的物質(zhì)濃度。多利用的放射性同位素有¹²⁵I、¹³¹I、³H、¹⁴C、³²P等。過去多利用放射免疫測(cè)定法，但這有需要使用放射性物質(zhì)的危險(xiǎn)，且隨著開發(fā)化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法等方法，使用上述放射免疫測(cè)定法的情況越來越少。

在熒光免疫測(cè)定法中，利用熒光反應(yīng)(fluorescence)來測(cè)定抗原和抗體的結(jié)合。熒光反應(yīng)是指，熒光物質(zhì)吸收特定波長(zhǎng)的光，使得熒光物質(zhì)的分子激勵(lì)(excitation)，重新回到原來的狀態(tài)，并放出與吸收的光不同的波長(zhǎng)的光的反應(yīng)。當(dāng)利用于免疫測(cè)定時(shí)，在要測(cè)定的物質(zhì)之類的物質(zhì)附著熒光物質(zhì)，或者在與要測(cè)定的物質(zhì)反應(yīng)的抗體附著熒光物質(zhì)，從而發(fā)生抗原抗體反應(yīng)。在反應(yīng)結(jié)束后，若透射可進(jìn)行熒光反應(yīng)的波長(zhǎng)的光，則與熒光物質(zhì)的量成正比地呈現(xiàn)熒光，并根據(jù)上述熒光的量來計(jì)算測(cè)定物質(zhì)的濃度。

在化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法中，利用化學(xué)發(fā)光反應(yīng)(chemiluminescence)來測(cè)定抗原和抗體的結(jié)合。化學(xué)發(fā)光反應(yīng)是指，使化學(xué)發(fā)光物質(zhì)激勵(lì)(excitation)，并回到基態(tài)(ground?state)而發(fā)光的現(xiàn)象，這在使分子激勵(lì)的能量不是光而是化學(xué)反應(yīng)的方面，與熒光不同。當(dāng)利用于免疫測(cè)定時(shí)，與其他方法相同，在要測(cè)定的物質(zhì)之類的物質(zhì)附著化學(xué)發(fā)光物質(zhì)，或者在與要測(cè)定的物質(zhì)反應(yīng)的抗體附著化學(xué)發(fā)光物質(zhì)，從而發(fā)生抗原抗體反應(yīng)。在反應(yīng)結(jié)束后，并在進(jìn)行所需的化學(xué)反應(yīng)之后，測(cè)定所散發(fā)的發(fā)光程度，由此計(jì)算測(cè)定物質(zhì)的濃度。代表性的發(fā)光物質(zhì)有魯米諾(luminol)、異魯米諾(isoluminol)、吖啶酯(acridinium?ester)等。