[發(fā)明專利]動物源食品中兩對糖皮質(zhì)激素同分異構(gòu)體的同時(shí)檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310756777.6
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN104749270A
• 公開（公告）日: 2015-07-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘國卿;鄭書展;牟峻;李剛;張春艷;白國濤
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

所屬技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析化學(xué)、食品安全檢測領(lǐng)域，涉及一種動物源食品中倍他米松和地塞米松、氟米龍和去羥米松的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，尤其是能將倍他米松和地塞米松、氟米龍和去羥米松兩對同分異構(gòu)體色譜分離并確證分析。

背景技術(shù)

倍他米松(Betamethasone)和地塞米松(Dexamethasone)、氟米龍(Fluorometholone)和去羥米松(Desoxinetasone)屬于糖皮質(zhì)激素類獸藥，在養(yǎng)殖業(yè)中存在濫用、誤用的情況，使得一些動物源食品中會出現(xiàn)這類激素獸藥的殘留問題，長期食用含有糖皮質(zhì)激素類獸藥的動物源食品會影響機(jī)體的激素平衡，對幼兒可造成發(fā)育異常的后果，而且有致癌危險(xiǎn)。國內(nèi)外對其在食品中的最高殘留量均做了限制，而對食品中糖皮質(zhì)激素進(jìn)行控制需要準(zhǔn)確的分析方法做支持。但由于倍他米松和地塞米松、氟米龍和去羥米松是兩對差向異構(gòu)體，這種僅在碳原子構(gòu)型上不同的非對映異構(gòu)體在色譜行為上非常相似，難以完全分離。通常這類異構(gòu)體的分離需要使用非常規(guī)的手性色譜分離柱，但成本較高，難以廣泛應(yīng)用。目前的檢測分析方法均無法使用常規(guī)色譜柱對這兩對異構(gòu)體進(jìn)行色譜分離，使得當(dāng)樣品顯示陽性時(shí)，無法判斷是含有混合物還是單一異構(gòu)體，也無法確證是哪一種異構(gòu)體，給檢測結(jié)果的判定帶來困難，容易造成錯誤判斷。

發(fā)明內(nèi)容

為降低檢測成本、提高檢測準(zhǔn)確性，本發(fā)明目的是提供一種能夠使用常規(guī)色譜柱分離倍他米松和地塞米松、氟米龍和去羥米松是兩對異構(gòu)體的方法，可同時(shí)檢測動物源食品中倍他米松、地塞米松、氟米龍、去羥米松的殘留量。

本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案是：一種能夠使用常規(guī)色譜柱檢測動物源食品中倍他米松和地塞米松、氟米龍和去羥米松是兩對異構(gòu)體的方法，包括如下步驟：

(1)樣品提取：稱取2.5-5.0g樣品，加入20mL甲醇，渦旋后振蕩15min，超聲10min，10000r/min離心5min，上清液移出至旋蒸瓶，40℃以下旋蒸至近干。將旋蒸瓶內(nèi)液體轉(zhuǎn)移至離心試管，用2ml甲醇洗滌旋蒸瓶，洗滌液轉(zhuǎn)入試管，用水定容至14ml，渦旋混勻2min，10000r/min離心5min，收集上清液待用。

(2)提取液凈化：將固相萃取柱裝好，用甲醇5ml，水5ml活化，將提取液上柱，控制流速＜2ml/min，分別用淋洗液4ml，正己烷5ml淋洗，使用6ml甲醇洗脫。洗脫液40℃以下氮?dú)獯蹈桑尤?ml定容液定容，超聲1min，過0.2μm濾膜過濾。

(3)使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。

高效液相色譜條件：

色譜柱：Acquity?UPLC?BEH?C18，1.7μm，2.1×100mm；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：5μl；

流動相A：含甲醇的乙腈，流動相B：含甲醇的水，梯度洗脫；

流速：0.3ml/min。

質(zhì)譜條件：

離子化模式：ESI+；

源電壓：2.5kV；

錐孔電壓：30V；

源溫度：120℃；

脫溶劑氣溫度：350℃；

脫溶劑氣流量：650L/H；

錐孔氣流量：50L/H。

在步驟(2)中所述固相萃取柱為ENVI-18固相萃取住或HLB固相萃取柱。

在步驟(2)中所述淋洗液為丙酮+水(2+8，v/v)。

在步驟(2)中所述定容液為乙腈+水(3+7，v/v)。

在步驟(3)中所述流動相A為乙腈+甲醇(90+5，v/v)，流動相B為水+甲醇(90+5，v/v)。

在步驟(3)中所述梯度洗脫的梯度變化為：

0～7分鐘，流動相A30％，流動相B70％；

7～10分鐘，流動相A30～50％，流動相B70～50％；

10～12分鐘，流動相A50～70％，流動相B50～30％；

12～13分鐘，流動相A70～30％，流動相B30～70％；

13～15分鐘，流動相A30％，流動相B70％；

進(jìn)一步地，所述動物源食品選自豬肉、牛肉、羊肉、羊肝、雞蛋、牛奶、蜂蜜。

進(jìn)一步地，所述糖皮質(zhì)激素包括倍他米松和地塞米松、氟米龍和去羥米松的至少一種。

本發(fā)明的有益效果是：

1本發(fā)明的檢測方法可以同時(shí)測定動物源食品中的倍他米松和地塞米松、氟米龍和去羥米松。