[發明專利]一種多殺菌素的補料發酵及分離純化方法

無效

• 申請號: 201310756417.6
• 申請日: 2013-12-31
• 公開（公告）號: CN103725734A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 盧文玉;王美玲;尹靜;趙方龍
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12P19/62
• 分類號: C12P19/62;C07H17/08;C07H1/08;C12R1/01
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 陸藝

1.一種多殺菌素的補料發酵方法，其特征是包括如下步驟：

（1）將能提高多殺菌素產量的基因工程菌LU104經斜面培養、種子培養，得到種子液；

（2）將種子液以接種量5%-15%的比例接種到發酵培養基中，于30℃、200-250rpm發酵168-288h，在發酵0-140h時，一次性補加混合油脂和玉米漿，使混合油脂的質量濃度為1-4%，使玉米漿質量濃度為0.5-3%，再在141-150h第二次補加玉米漿，使第二次補加玉米漿的質量濃度為0.5-3%，所述混合油脂是由按質量比為0.5-4:1的油酸甲酯和植物油組成，發酵結束，得到補料發酵液。

2.根據權利要求1所述的一種多殺菌素的補料發酵方法，其特征是所述發酵培養基組份按g/L計：葡萄糖50-70、麥芽糖5-20、豆油15-30、棉籽蛋白20-30、豆粉5-15、酵母膏10-25，K₂HPO₄0.5-2，NaCl0.5-2，MgSO₄2-3，CaCO₃5-7，余量為水，pH=7.5-8.0。

3.根據權利要求1所述的一種多殺菌素的補料發酵方法，其特征是所述步驟（2）為：將種子液以接種量10%的比例接種到發酵培養基中，于30℃、220rpm發酵240h，得到補料發酵液；在發酵96h時，一次性補加混合油脂和玉米漿，使混合油脂的質量濃度為3%，使玉米漿質量濃度為1%，再在144h第二次補加玉米漿，使第二次補加玉米漿的質量濃度為1%，所述混合油脂是由按質量比為2:1的油酸甲酯和植物油組成。

4.根據權利要求1或3所述的一種多殺菌素的補料發酵方法，其特征是所述植物油為菜籽油、玉米油、花生油、大豆油或葵花籽油。

5.一種多殺菌素的補料發酵液的分離純化方法，其特征是包括如下步驟：

（1）按體積比為1：0.5-1.5的比例，向補料發酵液中加入等體積的丙酮，混勻后于無光照條件下靜止18-30h，離心后保留上清液；

（2）將上清液調pH至10-11，以40-70mL/h的流速過大孔樹脂進行動態吸附；分別用去離子水和體積濃度為30%-95%的丙酮水溶液進行梯度洗脫；

（3）收集體積濃度為95%的丙酮水溶液的洗脫液進行超濾、納濾，得到濃縮液；

（4）用乙酸乙酯萃取濃縮液，用旋轉蒸發蒸去乙酸乙酯后得到多殺菌素。

6.根據權利要求5所述的一種多殺菌素的補料發酵液的分離純化方法，其特征是大孔樹脂的型號為：D3520、HDP300、D101、X-5、HDP100或NKA。