[發明專利]一種決明子多糖定量檢測方法

有效

• 申請號: 201310754301.9
• 申請日: 2013-12-31
• 公開（公告）號: CN103728263A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 姚松君;高新開;熊斌
• 申請（專利權）人: 無限極（中國）有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉;張燕玲

技術領域

本發明屬于食品、藥物分析領域，具體涉及一種決明子多糖定量檢測方法。

背景技術

目前，用于決明子多糖含量的測定方法主要借多糖的方法來測定決明子多糖的含量：包括顯色法、同位素標記法、免疫學法、生物檢測法、高效液相色譜-示差檢測法和蒸發光散射檢測法等。顯色法不需要大型儀器、且操作簡單，易滿足快速測定的需要，因此廣泛應用于決明子多糖的檢測。例如蒽酮-硫酸法（鐘先鋒，謝明勇，黃桂東，決明子有效成分的提取.南昌大學學報，2004，28：96-98）和硫酸-苯酚法（郭曉強，顏軍，鄔曉勇，徐光域，范春華，茍小軍.決明子水溶性多糖的純化及抗氧化活性研究.食品科學，2007，08：205-208）。

但是顯色法存在方法學干擾較大、重現性較差等缺點。首先，現有方法對于決明子含量的干擾物質考慮較少。常規決明子樣品前處理方法“決明子-粉碎→脫脂→沸水提取→濃縮（得到粗多糖）→除蛋白→醇沉→離心轉溶（得到精多糖）”，操作繁瑣，樣品量損失大。因此，對于顯色法而言，找到影響最終結果的決明子干擾物，從而簡化前處理步驟是非常必要的。聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP）具有良好的生物安全性和吸附絡合性，能夠有效除去多酚物質、蛋白質，多酚類物質通過競爭吸附占據PVPP的吸附活性點，因此，多酚類物質被吸附的量遠大于蛋白質（黎新明，崔英德，廖列文，PVPP對啤酒中多酚類物質和蛋白質的吸附作用比較.食品科學，2002，8：74-76）。目前PVPP已用于啤酒行業中除去多酚和蛋白質，從而提高穩定性（李超，劉東品，常智剛.PVPP吸附啤酒中多酚類物質的分析.釀酒科技，2009，02：110-112）。目前也有PVPP用于其他飲料中除去多酚物質的研究報道（易國斌，崔英德，廖列文，黎新明，PVPP吸附綠茶飲料中茶多酚的研究.食品科學.2001,22：14-16）。

其次，決明子多糖為多種單糖按照一定比例組成，而現有方法一般以葡萄糖為標準品，通過建立標準曲線來獲取決明子多糖含量，所以結果往往與真實值偏差較大。因此該類方法測定決明子多糖含量時，對照品的選擇尤為重要。

結合決明子多糖的理化性質，通過對前處理步驟、對照品的選擇進行研究，研發一種標準化、簡便化、快捷化的決明子專屬的多糖定量檢測方法，對于此類物質的生產、科研都具有重要意義。

發明內容

為了克服現有技術的缺點與不足，本發明的目的在于提供一種決明子多糖定量檢測方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種決明子多糖定量檢測方法，包括以下步驟：

（1）粉碎：將待測決明子進行粉碎，過20～80目篩得到決明子粉料，干燥后備用；

（2）脫脂去色：用丙酮浸泡決明子粉料，振搖30min后，靜置30min，倒去上層清液；重復該步驟至上層清液無色后，固液分離得脫脂粉料；

（3）熱水提?。河?0～100℃熱水對脫脂粉料進行提取2～3小時，合并濾液獲得提取液；

（4）純化處理：

a.聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP）處理：按0.5～5g/100mL的濃度往步驟（3）的提取液中加入聚乙烯聚吡咯烷酮，慢速攪拌1～3小時后，過濾，合并濾液；將濾液加入去離子水，定容，得待測樣品液；或，

b.聚乙烯聚吡咯烷酮/醇沉處理：按0.5～5g/100mL的濃度往步驟（3）的提取液中加入聚乙烯聚吡咯烷酮，慢速攪拌1～3小時后，過濾，合并濾液；緩慢加入相當于濾液3倍體積的無水乙醇，室溫靜置4小時，離心后取沉淀物；往沉淀物加入去離子水復溶，定容，得待測樣品液；

（5）測定：以混合單糖標準樣品建立標準曲線，以苯酚-硫酸法測定待測樣品液的多糖濃度，即為待測決明子的多糖濃度；

所述混合單糖標準樣品是由混合單糖配制而成，所述混合單糖包括摩爾百分數90%以上的甘露糖、葡萄糖、半乳糖和木糖；甘露糖、葡萄糖、半乳糖和木糖的摩爾比例為43:8:21:19。

步驟（1）所述的干燥后備用是將決明子粉料在60℃下干燥6小時，然后置于干燥器中備用。

步驟（2）所述的決明子粉料與丙酮的料液重量比為1:（15～30）。

步驟（3）所述的脫脂粉料與熱水的料液比為1:（20～35）（g/mL）。

步驟（5）所述混合單糖在配成混合單糖標準樣品前先于102℃烘干至恒重后備用。

步驟（5）所述混合單糖還包括葡萄糖醛酸、氨基半乳糖和阿拉伯糖；所述甘露糖、葡萄糖醛酸、氨基半乳糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖的摩爾比為43:4:1:8:21:19:5。