[發(fā)明專利]一種含有NADH激酶基因的工程菌及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310750790.0
• 申請日: 2013-12-31
• 公開（公告）號: CN103740630A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李正軍;陳國強;吳瓊;張潔
• 申請（專利權(quán)）人: 北京化工大學(xué)
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12P7/62;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.一種構(gòu)建重組菌的方法，為將NADH激酶編碼基因pos5和合成聚-3-羥基丁酸酯的基因phbCAB導(dǎo)入目的菌中，得到重組菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述NADH激酶編碼基因pos5和合成聚-3-羥基丁酸酯的基因phbCAB通過重組載體導(dǎo)入目的菌中；

所述重組載體為將NADH激酶編碼基因pos5表達(dá)盒插入含有合成聚-3-羥基丁酸酯的基因phbCAB的表達(dá)載體中，得到的重組載體。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述NADH激酶編碼基因pos5表達(dá)盒包括驅(qū)動NADH激酶編碼基因pos5表達(dá)的丙酮酸脫羧酶啟動子、NADH激酶編碼基因pos5和終止子。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

所述NADH激酶編碼基因pos5來源于釀酒酵母Saccharomyces?cerevisiae?s288c；

所述NADH激酶的氨基酸序列為序列表中的序列3。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：

所述含有合成聚-3-羥基丁酸酯的基因phbCAB的表達(dá)載體為pBHR68；

所述NADH激酶編碼基因pos5的核苷酸序列為序列表中的序列2自5’末端第223-1416位核苷酸；

所述合成聚-3-羥基丁酸酯的基因phbCAB的核苷酸序列為序列表中的序列4；

所述NADH激酶編碼基因pos5表達(dá)盒的核苷酸序列為序列表中的序列2；

所述出發(fā)菌為大腸桿菌，所述大腸桿菌具體為E.coli?JM109。

6.由權(quán)利要求1-5中任一所述的方法構(gòu)建的重組菌。

7.一種生產(chǎn)聚-3-羥基丁酸酯的方法，包括如下步驟：發(fā)酵權(quán)利要求6所述的重組菌，收集發(fā)酵產(chǎn)物，即得到聚-3-羥基丁酸酯。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：

所述發(fā)酵溫度為30℃-40℃；所述發(fā)酵時間為40-50h；

所述發(fā)酵溫度具體為37℃；所述發(fā)酵時間具體為48h。

9.一種制備聚-3-羥基丁酸酯的重組載體，為將NADH激酶編碼基因pos5表達(dá)盒插入含有合成聚-3-羥基丁酸酯的基因phbCAB的表達(dá)載體中，得到的重組載體；

所述NADH激酶編碼基因pos5表達(dá)盒具體包括驅(qū)動NADH激酶編碼基因pos5表達(dá)的丙酮酸脫羧酶啟動子、NADH激酶編碼基因pos5和終止子；

所述NADH激酶編碼基因pos5表達(dá)盒的核苷酸序列具體為序列表中的序列2；

所述含有合成聚-3-羥基丁酸酯的基因phbCAB的表達(dá)載體具體為pBHR68。

10.權(quán)利要求6所述的重組菌或權(quán)利要求9所述的重組載體在提高聚-3-羥基丁酸酯產(chǎn)量中的應(yīng)用。