[發明專利]一種通用型重組表達載體及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201310750733.2
• 申請日: 2013-12-31
• 公開（公告）號: CN103725705A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 趙琦;劉婕;萬曉春
• 申請（專利權）人: 深圳先進技術研究院
• 主分類號: C12N15/65
• 分類號: C12N15/65;C12N15/70;C12N15/66
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;熊永強

1.一種通用型重組表達載體，其特征在于，所述通用型重組表達載體為將多功能標簽的編碼基因插入到原核表達質粒或真核表達質粒的多克隆位點后得到的重組載體；所述多功能標簽的編碼基因包括His,c-myc,flag,HA,GST和GFP標簽的編碼基因中的至少一種，所述原核表達質粒為pET28，pET32或pGEX，所述真核表達質粒為pcDNA3.1或pPICZ。

2.根據權利要求1所述的通用型重組表達載體，其特征在于，所述多功能標簽的編碼基因中順次連接有GFP，HA，Flag，GST，c-myc標簽的編碼基因。

3.根據權利要求1或2所述的通用型重組表達載體，其特征在于，所述pET32質粒為pET32a、pET32b或pET32c質粒，所述多功能標簽的編碼基因插入到所述pET32a、pET32b或pET32c質粒的NcoI位點和NotI位點之間。

4.根據權利要求2所述的通用型重組表達載體，其特征在于，所述GFP標簽和HA標簽的編碼基因之間插入有SGSG氨基酸序列的基因編碼序列。

5.根據權利要求2所述的通用型重組表達載體，其特征在于，所述HA標簽和Flag標簽的編碼基因之間插入有GG氨基酸序列的基因編碼序列。

6.根據權利要求2所述的通用型重組表達載體，其特征在于，所述Flag標簽和GST標簽的編碼基因之間插入有GGGGSGGGGS氨基酸序列的基因編碼序列。

7.根據權利要求2所述的通用型重組表達載體，其特征在于，所述GST標簽和c-myc標簽的編碼基因之間插入有氨基酸G的基因編碼序列。

8.一種通用型重組表達載體的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）提供質粒載體，所述質粒載體為原核表達質粒或真核表達質粒，所述原核表達質粒為pET28，pET32或pGEX，所述真核表達質粒為pcDNA3.1或pPICZ；

（2）提供多功能標簽的編碼基因，所述多功能標簽為His,c-myc,flag,HA,GST和GFP標簽的至少一種；

（3）將步驟（2）所述的多功能標簽的編碼基因插入到所述質粒載體的多克隆位點后得到所述通用型重組表達載體。

9.根據權利要求8所述的通用型重組表達載體的構建方法，其特征在于，所述步驟（2）中，所述多功能標簽的編碼基因中順次連接有所述GFP，HA，Flag，GST，c-myc標簽的編碼基因。

10.一種利用權利要求1～7任一項所述的通用型重組表達載體在外源重組蛋白的表達、示蹤、純化、和檢測中的應用。