[發明專利]β-內酰胺類抗生素耐藥性的檢測方法、系統及其應用

有效

• 申請號: 201310750659.4
• 申請日: 2013-12-31
• 公開（公告）號: CN103645273A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 佟雪梅;趙煥鑄
• 申請（專利權）人: 佟雪梅
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/72
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 吳開磊

1.β-內酰胺類抗生素耐藥性的檢測方法，其特征在于，包括：

制備濃度為0.5-0.6麥氏單位的待測微生物的懸濁液；

將所述待測微生物的懸濁液與β-內酰胺類抗生素的標準液按照體積比1:1-1:2的比例混合均勻，靜置20-30分鐘，得到混合液；

從所述混合液中除去所述待測微生物，得到待測液；

獲取所述待測液的液相色譜圖；

若液相色譜圖中包含β-內酰胺類抗生素的標志峰及其β-內酰胺作用的碎片峰，則判定所述待測微生物對β-內酰胺類抗生素耐藥；

若液相色譜圖中包含β-內酰胺類抗生素的標志峰，但不包含其β-內酰胺作用的碎片峰，則判定所述待測微生物對β-內酰胺類抗生素敏感。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述β-內酰胺類抗生素的標準液包括：

濃度為敏感標準濃度的β-內酰胺類抗生素標準液、濃度為中介耐藥濃度的β-內酰胺類抗生素標準液和耐藥標準濃度的β-內酰胺類抗生素標準液；

所述混合液包括：所述待測微生物的懸濁液分別與所述敏感標準濃度、所述中介耐藥濃度和所述耐藥標準濃度的β-內酰胺類抗生素標準液混合得到的三種混合液；

所述待測液包括：將上述三種混合液分別除去所述待測微生物，得到對應敏感標準濃度的敏感待測液、對應中介耐藥濃度的中介待測液、對應耐藥標準濃度的耐藥待測液的三種待測液；

獲取所述待測液的液相色譜圖包括：分別獲取上述三種待測液的液相色譜圖；

所述判定包括：

若所述三種待測液的液相色譜圖中，均包含β-內酰胺類抗生素的標志峰及其β-內酰胺作用的碎片峰，則判定所述待測微生物對β-內酰胺類抗生素耐藥；

若所述三種待測液的液相色譜圖中，均包含β-內酰胺類抗生素的標志峰但均不包含β-內酰胺類抗生素的β-內酰胺作用的碎片峰，則判定所述待測微生物對β-內酰胺類抗生素敏感。

3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述判定還包括：

若所述三種待測液的液相色譜圖中，所述敏感待測液的液相色譜圖中包含β-內酰胺類抗生素的標志峰及其β-內酰胺作用的碎片峰，而所述中介待測液和耐藥待測液的液相色譜圖中，均包含β-內酰胺類抗生素的標志峰但均不包含β-內酰胺類抗生素的β-內酰胺作用的碎片峰，則判定所述待測微生物對β-內酰胺類抗生素中度敏感。

4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述判定還包括：

若所述三種待測液的液相色譜圖中，所述敏感待測液和所述中介待測液的液相色譜圖中，均包含β-內酰胺類抗生素的標志峰及其β-內酰胺作用的碎片峰，而所述耐藥待測液的液相色譜圖中，包含β-內酰胺類抗生素的標志峰但不包含β-內酰胺類抗生素的β-內酰胺作用的碎片峰，則判定所述待測微生物對β-內酰胺類抗生素中介耐藥。

5.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述判定步驟之后，還包括：

將液相色譜分離得到的β-內酰胺類抗生素進行質譜檢測，得到β-內酰胺類抗生素的標志峰的質量數；或，將液相色譜分離得到的β-內酰胺類抗生素及其β-內酰胺作用的碎片進行質譜檢測，得到β-內酰胺類抗生素的標志峰的質量數及其β-內酰胺作用的碎片峰的質量數；

將所述β-內酰胺類抗生素的標志峰的質量數與抗生素標準譜圖中的β-內酰胺類抗生素的標志峰質量數進行比對，相同時，則判定液相色譜分離得到的β-內酰胺類抗生素即為β-內酰胺類抗生素；不相同時，則判定液相色譜分離得到的β-內酰胺類抗生素非β-內酰胺類抗生素；

將β-內酰胺類抗生素的標志峰質量數及其β-內酰胺作用的碎片峰的質量數分別與所述抗生素標準譜圖中的β-內酰胺類抗生素的標志峰質量數及其β-內酰胺作用的碎片峰的質量數進行比對，相同時，則判定液相色譜分離得到的β-內酰胺類抗生素及其β-內酰胺作用的碎片即為β-內酰胺類抗生素及其β-內酰胺作用的碎片；不相同時，則判定液相色譜分離得到的β-內酰胺類抗生素及其β-內酰胺作用的碎片非β-內酰胺類抗生素及其β-內酰胺作用的碎片。

6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述從所述混合液中除去所述待測微生物，得到待測液，包括：

在所述混合液中加入緩沖液，殺滅所述待測微生物，過濾除掉所述待測微生物后，向濾液中加入電離液，獲得β-內酰胺類抗生素的離子溶液，將所述β-內酰胺類抗生素的離子溶液作為待測液。