[發明專利]抗HLA-G的單克隆抗體偶聯免疫磁珠在腫瘤細胞分選中的應用

有效

• 申請號: 201310749974.5
• 申請日: 2013-12-31
• 公開（公告）號: CN103756967B
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發明（設計）人: 盧英
• 申請（專利權）人: 盧英
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種抗HLA?G的單克隆抗體偶聯免疫磁珠在腫瘤細胞分選中的應用。本發明還提供一種腫瘤細胞的分選方法，包括以下步驟：（1）抗HLA?G的單克隆抗體偶聯免疫磁珠得HLA?G免疫磁珠；（2）將HLA?G免疫磁珠混勻后加入到待分選的細胞液中，用免疫磁珠分離方法進行分離。本發明的有益效果是：（1）選用HLA?G為分選腫瘤細胞標志物,HLA?G為腫瘤特異的廣譜性標志物,抗HLA?G抗體偶聯免疫磁珠后，特異性好，分選腫瘤效率高;（2）HLA?G偶聯免疫磁珠后敏感性和重復性較好，可以檢出相關的腫瘤細胞。

技術領域

本發明涉及一種分選腫瘤細胞的方法，一種以應用抗人白細胞抗原G(humanleukocyte antigen-G,HLA-G)抗體偶聯磁珠分選腫瘤細胞的方法。

背景技術

循環腫瘤細胞在外周血中的數量極少,通常在約1億個白細胞和500億個紅細胞中僅有數個腫瘤細胞，大約每10⁵～10⁷個單核細胞中才有一個循環腫瘤細胞。因此，為了提高循環腫瘤細胞的檢出率,通常需在檢測前行循環腫瘤細胞的富集。細胞富集可通過腫瘤細胞的特異性標志物(免疫分離)或細胞形態特征如細胞體積和密度等來實現。

常用的細胞富集技術主要有免疫磁分選、密度梯度離心和細胞過濾等。

1.1密度梯度離心法：是一種基于物理學特性、利用在一定離心力下細胞之間沉降率不同分離細胞的技術。這是實驗室一項常用的技術，用于分離單核細胞等。利用這項技術建立的Onclquick(Greiner Bio-One,Frickenhausen，Germany)和Ficoll-Hypaque分離法，利用專用的多孔屏障和密度梯度分離液，在一定離心力下分離出腫瘤細胞。這項技術設備簡單操作簡便，能得到細胞的完整形態，便于進一步鑒別，在部分臨床研究中顯示出一定的臨床意義，但是敏感性和特異性均不高，腫瘤細胞回收率低，限制了其臨床應用。

1.2膜過濾法：是利用腫瘤細胞直徑與血液細胞的區別，通過一定孔徑的膜來過濾細胞而達到分離細胞的目的。同密度梯度離心法不一樣，這項技術是利用細胞的形態學特點來富集腫瘤細胞的技術。一般血細胞直徑在8-llμm之間，而腫瘤細胞相對直徑較大(例如乳腺癌細胞直徑約30μm)，借此區別以分離腫瘤細胞和正常血液細胞。腫瘤細胞與部分血液細胞的差別并沒有那么明顯，是該技術被人詬病的方面，但是它的優勢同樣明顯：更多類型的腫瘤都適合利用大小來區分正常血液細胞而不因表面標志缺失或者腫瘤異質性導致的漏檢。第一個采用此法的是ISET(Isolation by Size of Epithilial Tumor cells),該方法設備簡單，操作方便，而且細胞表面標記能完整保留；聚集在一起的腫瘤細胞更容易分離，利于后續的進一步檢測。但是，循環中的腫瘤細胞孔徑不是均一的，在免疫系統攻擊及血液剪切力的作用下往往發生變形，因此膜孔徑的大小設定是個難題。有研究認為5μm的孔徑分離效果好，但是敏感性受到質疑。在此基礎上新發展的ScreenCell分離法，得到的腫瘤細胞除可常規檢測外還可用于細胞培養，且有較好的敏感性。

鑒于依照腫瘤細胞大小的分離方法的優勢，目前依據細胞大小分離腫瘤細胞的微過濾技術研發成功，初期的實驗結果顯示其比抗原抗體結合分離法有更高的靈敏性，更方便進行分子檢測，下面為相關的專門描述。