[發(fā)明專利]抗HLA-G的單克隆抗體偶聯(lián)免疫磁珠在腫瘤細(xì)胞分選中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310749974.5
• 申請(qǐng)日: 2013-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN103756967B
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盧英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 盧英
• 主分類號(hào): C12N5/09
• 分類號(hào): C12N5/09
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種腫瘤細(xì)胞的分選方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）抗HLA-G的單克隆抗體偶聯(lián)免疫磁珠得HLA-G免疫磁珠；所述抗HLA-G的單克隆抗體為MEM-G/2、MEM-G/9或4H84；所述免疫磁珠的制備：

取活化磁珠500μL，2mg/mL，以活性磁珠的質(zhì)量計(jì)，加入40 μL 5mg/mL的抗HLA-G的單克隆抗體，在1.5 mL微離心管中，于室溫下圓周混合3h，1 mL PBS清洗三次，加入500μL0.2mol/L 甘氨酸混合30min，封閉剩余的醛基；1 mL PBS清洗三次; 加入含有質(zhì)量百分比2.5%BSA的PBS溶液混合30min，封閉非特異性的吸附位點(diǎn)，PBS清洗3次，加入500μL PBS緩沖液漩渦震蕩，即得到濃度為2.0mg/mL的均勻的修飾有一抗的免疫磁珠；

（2）將HLA-G免疫磁珠混勻后加入到待分選的細(xì)胞液中，用免疫磁珠分離方法進(jìn)行分離；具體方法是 ：取待分選的細(xì)胞液100μL，加入混勻的 HLA-G 免疫磁珠 40μL，2mg/mL，28℃溫箱中孵育 30 分鐘后，在磁力架上利用免疫磁珠磁分離方法，將懸浮液棄之，用0.01MPBS，pH=7.4重復(fù)洗滌 2-3 次，將懸浮液棄之，最后每管用 100μL PBS 重懸磁珠后，使用細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)腫瘤細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分選方法，其特征在于，所述抗 HLA-G的單克隆抗體和免疫磁珠之間是抗體飽合偶聯(lián)，用料質(zhì)量比為200μg：1000μg。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分選方法，其特征在于，所述待分選的細(xì)胞液與 HLA-G免疫磁珠的用量體積比為100：(20－100)。