[發(fā)明專利]一種快速檢測多種致病菌的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310749891.6
• 申請日: 2013-12-31
• 公開（公告）號: CN104749366A
• 公開（公告）日: 2015-07-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 葛玉卿;金慶輝;毛紅菊;趙建龍
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海微系統(tǒng)與信息技術(shù)研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/31;B82Y15/00
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 潘振甦

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種快速檢測多種致病菌的方法，更確切地說涉及一種可調(diào)制雙功能納米球制備及其在多種食源性致病菌快速檢測的應(yīng)用，也即所述的雙功能復(fù)合納米球，可以用于醫(yī)學(xué)診斷、食品安全、環(huán)境監(jiān)測等方面。屬于微生物檢測領(lǐng)域。

背景技術(shù)

細(xì)菌性病原體嚴(yán)重危害人類的健康。食源性致病微生物種類繁多，缺乏靈敏、便捷、特異的快速檢測技術(shù)，是食品安全無法得到有效保障的主要原因之一。因此開發(fā)針對致病菌的快速、靈敏、可靠的檢測方法和現(xiàn)場、便攜的檢測儀器，是食品安全和國家安全保障的迫切需要。

用傳統(tǒng)的微生物選擇培養(yǎng)方式來檢測致病菌的存在，結(jié)果雖然可靠，被視為微生物檢測的金標(biāo)準(zhǔn)。但是，傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)法耗時長、步驟繁瑣、需要多種培養(yǎng)基和試劑，無法滿足當(dāng)今社會一些突發(fā)事件對微生物現(xiàn)場快速檢測的迫切需求。因此基于分子生物學(xué)的各種檢測方法應(yīng)運(yùn)而生。這些方法概括起來主要有三類：（1）基于鏈?zhǔn)骄酆戏磻?yīng)的檢測。此方法敏感、準(zhǔn)確、快速,可替代病原學(xué)檢測；（2）基于免疫反應(yīng)的檢測。這類方法經(jīng)濟(jì)實(shí)用，重現(xiàn)性好，快速，目前大多數(shù)食品微生物快速檢測的商業(yè)化產(chǎn)品的反應(yīng)原理是基于三明治免疫分析，即免疫復(fù)合物包含固定抗體、靶細(xì)菌和二抗標(biāo)記物。（3）生物傳感器。它是與生物、生物衍生物相關(guān)的分析器件、聯(lián)合或者集成的物理化學(xué)傳感器或者轉(zhuǎn)換微系統(tǒng)。與傳統(tǒng)的檢測方法相比,生物傳感器具有體積小、成本低、靈敏度高、選擇性及抗干擾能力強(qiáng)和響應(yīng)快等優(yōu)點(diǎn)，在食品安全檢測中具有廣泛的應(yīng)用價值，是食品安全檢測的一個重要發(fā)展趨勢。

近年來，很多研究者基于免疫學(xué)原理在開發(fā)致病菌檢測新方法和新器件方面做了很多有益的探索。Tan課題組（Proc.Natl.Acad.Sci.2004）使用抗體連接的硅基熒光納米材料發(fā)展了一種快速、超靈敏的原位免疫分析方法，這種方法不需要擴(kuò)增和富集就能達(dá)到檢測單種菌。2009年P(guān)ividori課題組（Anal.Chem.2009）利用由石墨-環(huán)氧復(fù)合物構(gòu)建了一種磁傳感器，可以通過免疫的方法在富集捕獲致病菌的同時，通過電化學(xué)檢測或者雙標(biāo)記PCR檢測沙門氏菌。這種新方法具有靈敏，快速的優(yōu)點(diǎn)。然而，這些方法都局限于在一次分析中檢測一種致病菌，并且在檢測過程中需要昂貴的儀器設(shè)備和較高檢測費(fèi)用。

在一次分析過程中同時檢測多種細(xì)菌的方法更能滿足目前快速、靈敏、特異的檢測致病菌的需求，可有效減少時間和節(jié)約成本。近年來研究者們發(fā)展了多種多元分析的方法來同時檢測2-3種致病菌，如利用復(fù)合PCR技術(shù)在一次分析中檢測多種致病菌；基于核酸雜交原理的DNA微陣列技術(shù)可以檢測多種致病菌；利用免疫化學(xué)方式包括酶聯(lián)免疫吸附分析、免疫磁分離、使用有機(jī)染料標(biāo)記細(xì)菌特異性的抗體進(jìn)行熒光分析等。尤其是磁性顆粒具有粒徑小，比表面積大，表面有許多懸空鍵，可以通過共聚、表面改性賦予其表面多種反應(yīng)性功能基等優(yōu)點(diǎn)；同時生物相容性良好，有利于生物分子（如：酶、核酸、抗體等）的固定；易于在磁場作用下迅速聚集，所以廣泛應(yīng)用于生物分析領(lǐng)域。