[發明專利]利用海南粗榧非胚性細胞懸浮培養生產紫杉醇及其前體物巴卡亭III的方法

有效

• 申請號: 201310749388.0
• 申請日: 2013-12-30
• 公開（公告）號: CN103725725A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 喬飛;江雪飛;王榮香;王琴飛;叢漢卿;錢丹;趙小青;尹俊梅
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院熱帶作物品種資源研究所
• 主分類號: C12P17/02
• 分類號: C12P17/02
• 代理公司: 廣州市越秀區海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 王洪娟

1.一種利用海南粗榧非胚性細胞懸浮培養生產紫杉醇及其前體物巴卡亭III的方法，其特征是含以下步驟：

（1）取海南粗榧外植體，在愈傷誘導培養基上進行培養，獲得非胚性愈傷組織；

（2）將步驟（1）中獲得的非胚性愈傷組織在愈傷增殖培養基上進行增殖培養，獲得生長迅速疏松的細胞團；

（3）將步驟（2）獲得的細胞團接種至細胞懸浮啟動培養基中培養，獲得液體培養的非胚性懸浮細胞系；

（4）將步驟（3）獲得的非胚性懸浮細胞系靜置沉淀后，取沉淀接種至液體增殖培養基中，獲得生長周期穩定、生長迅速的懸浮細胞；

（5）將步驟（4）培養的懸浮細胞離心沉淀、棄上清，沉淀經后續處理，用液相色譜法分離提純獲得紫杉醇及其前體物巴卡亭III。

2.根據權利要求1中所述的利用海南粗榧非胚性細胞懸浮培養生產紫杉醇及其前體物巴卡亭III的方法，其特征是：步驟（1）中所述的海南粗榧外植體培養前經切段和消毒工序處理。

3.根據權利要求1中所述的利用海南粗榧非胚性細胞懸浮培養生產紫杉醇及其前體物巴卡亭III的方法，其特征是：步驟（1）中所述的海南粗榧外植體為當年生新葉。

4.根據權利要求1中所述的利用海南粗榧非胚性細胞懸浮培養生產紫杉醇及其前體物巴卡亭III的方法，其特征是：步驟（1）中所述的愈傷誘導培養基的配方為：(NH₄)₂SO₄132～136mg/L+H₃BO₃2.8～3.2mg/L+CaCl₂112～114mg/L+CoCl₂·6H₂O0.023～0.027mg/L+CuSO₄·5H₂O0.022～0.028mg/L+Na₂EDTA·2H₂O36.8～37.6mg/L+MgSO₄121.8～122.4mg/L+MnSO₄·H₂O9～11mg/L+Na₂MoO₄·2H₂O0.24～0.26mg/L+KI0.65～0.85mg/L+KNO₃2400～2600mg/L+NaH₂PO₄140～160mg/L+ZnSO₄·7H₂O1.8～2.2mg/L+肌醇90～110mg/L+煙酸0.9～1.1mg/L+鹽酸吡哆醇0.9～1.1mg/L+鹽酸硫胺9～11mg/L+6-BA0.09～0.11mg/L+NAA0.09～0.11mg/L+2,4-D0.09～0.11mg/L+蔗糖20-30g/L+1.0%瓊脂，pH為5.6～5.9，培養溫度為25～28℃，暗培養，培養時間為21～28天。