[發(fā)明專利]一種抗水貂綠膿桿菌性肺炎獸藥的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310748239.2
• 申請(qǐng)日: 2013-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN103690951A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙成新;李曉麗;王先德;欒浩麟;房超;鄒德志;劉懷華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 煙臺(tái)金海藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/40
• 分類號(hào): A61K39/40;A61K9/107;A61P31/04;C12N1/20
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• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及水貂獸藥的制備方法，尤其涉及預(yù)防和治療水貂綠膿桿菌性肺炎獸藥的制備方法。

背景技術(shù)

水貂綠膿桿菌性肺炎是由綠膿桿菌引起的嚴(yán)重危害2～7周齡小水貂的一種細(xì)菌性傳染病，發(fā)病率高(5～90%)，死亡率高(1～80%)，即便沒(méi)有死亡的小水貂也會(huì)體重減輕，生長(zhǎng)遲緩，給水貂飼養(yǎng)業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。該病呈世界性分布，在所有養(yǎng)水貂國(guó)家和地區(qū)流行且危害嚴(yán)重。我國(guó)獸醫(yī)專家郭玉璞于1982年在北京首次確認(rèn)此病以來(lái)，現(xiàn)在全國(guó)許多省區(qū)（如四川、重慶、北京、上海、浙江等）都相繼有本病的報(bào)道。

抗菌藥物防治是當(dāng)前防治水貂綠膿桿菌性肺炎的一項(xiàng)最重要的措施，但其存在許多不足：由于綠膿桿菌對(duì)抗菌藥物易產(chǎn)生耐藥性，各地分離的菌株對(duì)抗菌藥物的敏感性不完全相同，甚至差別很大，致使抗菌藥的應(yīng)用受到一定的限制。

要想獲得針對(duì)某一水貂飼養(yǎng)場(chǎng)或地區(qū)的水貂綠膿桿菌性肺炎具有很好療效的藥物，必須從該地區(qū)或飼養(yǎng)場(chǎng)的病死水貂中分離出病原（綠膿桿菌），再進(jìn)行體外藥物敏感性試驗(yàn)，操作復(fù)雜和費(fèi)時(shí)，在我國(guó)基層獸醫(yī)工作中基本不能實(shí)現(xiàn)。另外，用藥物治療水貂綠膿桿菌性肺炎需要連續(xù)反復(fù)給藥，治療成本高，如用高霉素治療水貂綠膿桿菌性肺炎，每只水貂的藥物費(fèi)用在0.25～0.35元。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是：提供一種療效好，成本低的抗水貂綠膿桿菌性肺炎卵黃抗體獸藥的制備方法。

本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：一種抗水貂綠膿桿菌性肺炎卵黃抗體獸藥的制備方法，其步驟是：?

1、一種抗水貂綠膿桿菌性肺炎獸藥的制備方法，其特征在于：按如下步驟制得：

(1)菌種準(zhǔn)備及細(xì)菌的增殖

將真空凍干保存的綠膿桿菌用生理鹽水（生理鹽水為重量體積比為0.9%的氯化鈉水溶液）按體積比1∶1稀釋，接種于NAC瓊脂培養(yǎng)基，在?37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24小時(shí)，經(jīng)純度檢驗(yàn)沒(méi)有雜菌生長(zhǎng)后，用生理鹽水制成菌懸液接種于LB瓊脂培養(yǎng)基，37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36～48小時(shí)后，收集細(xì)菌。

所述LB培養(yǎng)基的配制按如下所需組分重量稱取混合：胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化鈉5g/L，瓊脂12.0g/L，加700-800ml蒸餾水溶解，然后加蒸餾水補(bǔ)至1000ml，116℃高壓滅菌30min后備用。

?(2)?制備滅活菌苗

將收集的細(xì)菌用生理鹽水懸浮成菌懸液，即把在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌菌落加入到生理鹽水中混勻，使每毫升菌懸浮含150～200億個(gè)細(xì)菌，用終濃度重量體積比為0.3%的甲醛在37℃下滅活24小時(shí)，即為制苗用抗原；把抗原乳化制成油乳劑滅活菌苗，并進(jìn)行滅活菌苗的安全檢驗(yàn)；

(3)?產(chǎn)蛋雞的免疫

選25周齡的健康產(chǎn)蛋母雞用安全檢驗(yàn)合格的滅活菌苗進(jìn)行免疫，免疫程序?yàn)椋?/p>

第1次免疫：每只雞腿肌注射0.2ml，頸部皮下注射0.2ml，

第2次免疫：2周后每只雞頸部皮下注射1.0ml，

第3次免疫：?2周后，每只雞頸部皮下多點(diǎn)注射1.5ml；

(4)?高免蛋的收集

產(chǎn)蛋雞第3次免疫后14天，開始抽樣測(cè)定高免雞蛋黃中抗水貂綠膿桿菌性肺炎卵黃抗體效價(jià)，蛋黃與生理鹽水按體積比1∶3稀釋后，加入等體積三氯甲烷萃提，上清液瓊擴(kuò)效價(jià)≥1∶16即為合格，之后收集雞蛋；

(5)提取抗水貂綠膿桿菌性肺炎卵黃抗體獸藥

A、蛋殼消毒：將雞蛋浸入加熱至42℃的0.1%新潔爾滅水溶液中消毒25～35分鐘，取出涼干或吹干備用；

B、打蛋分離蛋黃：采用手工或機(jī)械打蛋，充分除去蛋清、胚盤和系帶，收集蛋黃；

C、萃提：先充分?jǐn)嚢璧包S呈均勻膏狀，然后加入3倍體積的高壓的滅菌生理鹽水，再次充分?jǐn)嚢杌靹颍钩蔀榈包S液；在該蛋黃液中加入等體積的三氯甲烷，充分振蕩混合，靜置60分鐘后以3500～4000rpm用離心機(jī)離心30分鐘，收集離心管中的上清液；

D、加入滅活劑和穩(wěn)定劑：上清液按終濃度體積比為0.05%加入甲醛，充分?jǐn)嚢杌旌希芊?0～60分鐘后加入終濃度重量體積比為0.02%的穩(wěn)定劑吐溫-20，混勻；

E、除菌過(guò)濾：用0.2～0.3um微孔濾膜過(guò)濾除菌，即得到抗水貂綠膿桿菌性肺炎卵黃抗體獸藥，主要成分是卵黃抗體；

(6)效價(jià)、安全檢驗(yàn)，形成產(chǎn)品