[發(fā)明專利]一種乙型肝炎病毒基因分型PCR檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310744571.1
• 申請日: 2013-12-30
• 公開（公告）號: CN103710465A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設計）人: 戴立忠;李勃;劉佳
• 申請（專利權）人: 湖南圣湘生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 北京聿宏知識產(chǎn)權代理有限公司 11372
• 代理人: 吳大建;歐穎

1.一種乙型肝炎病毒基因分型PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括核酸釋放劑和PCR反應液，所述核酸釋放劑包含莎梵婷（surfactin）0.01～0.5mmol/L，氯化鉀20～300mmol/L，十二烷基磺酸鈉0.01～2%和乙醇0.05～1%；所述PCR反應液中包含用于C型靶多核苷酸擴增和檢測的引物探針序列、用于B型靶多核苷酸擴增和檢測的引物探針序列和用于D型靶多核苷酸擴增和檢測的引物探針序列中的一種或多種；

其中，用于C型靶多核苷酸擴增和檢測的引物探針序列為，

C型上游引物：5’-GACTTCAACCCCAACAAGGATC-3’，

C型下游引物：5’-GCTGCTGGCACTGTTGTCAAT-3’，

C型探針：5’-CRGGGTTCACTCCACCACACGG-3’；

用于B型靶多核苷酸擴增和檢測的引物探針序列為，

B型上游引物：5’-AACTTTACGGGGCTTTATTCTTCTAC-3’，

B型下游引物：5’-CTGTAAGGGGTCCCACAAATTG-3’，

B型探針：5’-TACATCTATCAACAATGTCCTCCTGCAAA-3’；

用于D型靶多核苷酸擴增和檢測的引物探針序列為，

D型上游引物：5’-GTGGGTCACCATATTCTTGGGA-3’，

D型下游引物：5’-AACTGGTGGTCGGGAAAGAATC-3’，

D型探針：5’-CATGGGGCAGAATCTTTCCACCAGC–3’。

2.根據(jù)權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，試劑盒中還包括內(nèi)標，其序列為5’-CCTCTAGCGCTGCGAATAGAACTTCCTCTGTTCAAGCCTTCCCTTTATACGCTCAAGCTGGTTCTTCTTCAAGGTTCAAGCAATAGAAACGGAGATCTAC-3’，且所述PCR反應液中還包括用于檢測內(nèi)標的引物探針序列為，

內(nèi)標上游引物：5’-CCTCTAGCGCTGCGAATAGAA-3’，

內(nèi)標下游引物：5’-GTAGATCTCCGTTTCTATTGCTTGA-3’，

內(nèi)標探針：5'-TCAAGCCTTCCCTTTATACGCTCAAGC-3'。

3.根據(jù)權利要求2所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述PCR反應液為一種，其中包括用于C型靶多核苷酸擴增和檢測的引物探針序列和用于內(nèi)標擴增和檢測的引物探針序列，或者包括用于B型靶多核苷酸擴增和檢測的引物探針序列和用于內(nèi)標擴增和檢測的引物探針序列。

4.根據(jù)權利要求2所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述PCR反應液包括兩種，其中一種包括用于D型靶多核苷酸擴增和檢測的引物探針序列，而另一種包括用于內(nèi)標擴增和檢測的引物探針序列。

5.根據(jù)權利要求2所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述PCR反應液包括兩種，其中一種包括用于C型靶多核苷酸擴增和檢測的引物探針序列和用于內(nèi)標擴增和檢測的引物探針序列，而另一種包括用于B型靶多核苷酸擴增和檢測的引物探針序列和用于D型靶多核苷酸擴增和檢測的引物探針序列；或者是其中一種包括用于B型靶多核苷酸擴增和檢測的引物探針序列和用于內(nèi)標擴增和檢測的引物探針序列，而另一種包括用于C型靶多核苷酸擴增和檢測的引物探針序列和用于D型靶多核苷酸擴增和檢測的引物探針序列。

6.根據(jù)權利要求1～5中任意一項所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述PCR反應液中還包括PCR反應緩沖液、脫氧核糖核苷三磷酸和/或核糖核苷三磷酸；所述試劑盒中還包括酶混合液、HBV分型陽性對照和HBV分型陰性對照。

7.一種乙型肝炎病毒基因分型PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括PCR反應液，所述PCR反應液中包含序列為如下所示的用于靶多核苷酸擴增的C型上游引物、C型下游引物和用于靶多核苷酸檢測的C型探針；

C型上游引物：5’-GACTTCAACCCCAACAAGGATC-3’，

C型下游引物：5’-GCTGCTGGCACTGTTGTCAAT-3’，

C型探針：5’-FAM-CRGGGTTCACTCCACCACACGG-BHQ1-3’。