[發明專利]一種蜂蜜中氨基酸的測定方法

有效

• 申請號: 201310744335.X
• 申請日: 2013-12-30
• 公開（公告）號: CN103713078A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 陳志燕;范忠;孟冬玲;田兆福;李小蘭;徐雪芹
• 申請（專利權）人: 廣西中煙工業有限責任公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/34;G01N30/06
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 李紅團

1.一種蜂蜜中氨基酸的測定方法，其特征在于：用含有內標的稀鹽酸萃取液超聲萃取蜂蜜樣品，過濾膜后直接進入高效液相－串聯質譜儀進行測定，內標法定量。?

2.根據權利要求1所述的一種蜂蜜中氨基酸的測定方法，其特征在于，所述內標物為L-正纈氨酸。?

3.根據權利要求1所述的一種蜂蜜中氨基酸的測定方法，其特征在于，所述含有內標的稀鹽酸萃取液為含L-正纈氨酸的濃度為2μmol/L的0.03mol/L的HCl溶液。?

4.根據權利要求1所述的一種蜂蜜中氨基酸的測定方法，其特征在于，所述濾膜為0.22μm濾膜。?

5.根據權利要求1-4任一所述的一種蜂蜜中氨基酸的測定方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：?

（1）萃取液的制備：用0.03mol/L的HCl溶解定量的L-正纈氨酸，配制成含L-正纈氨酸2μmol/L的0.03mol/L的HCl溶液，作為萃取液；?

（2）標準工作溶液制備：用萃取液為溶劑，將17種氨基酸混標Ⅰ和4種氨基酸混合標準儲備液Ⅱ配成不同系列濃度的標準溶液，進行高效液相－串聯質譜檢測；然后以被測物的峰面積與其內標的峰面積的比值Y對被測物的濃度X進行線性回歸，求得各氨基酸的標準曲線；?

（3）樣品制備和分析：準確稱取0.5g待測蜂蜜樣品，放入50mL磨口三角瓶中，準確加入25mL萃取液，超聲15min，取出后搖蕩錐形瓶片刻使其混合均勻，經0.22μm濾膜過濾后進行高效液相－串聯質譜分析。?

6.根據權利要求5所述的一種蜂蜜中氨基酸的測定方法，其特征在于：所述步驟中的色譜條件如下：?

色譜柱：Agilent?ZORBAX?Eclipse?AAA色譜柱，Agilent?ZORBAX?Eclipse?AAA預柱；?

流速：0.6mL/min；?

柱溫：40℃；?

進樣量：5μL；?

流動相A：乙腈，流動相B：0.1﹪甲酸；?

梯度洗脫。?

7.根據權利要求5所述的一種蜂蜜中氨基酸的測定方法，其特征在于：所述步驟中的質譜條件如下：?

離子源：電噴霧電離源（ESI）；?

掃描方式：正離子掃描；?

檢測方式：多反應監測（MRM）；?

電噴霧電壓：5000V；?

離子源溫度：350℃；?

輔助氣Gas1壓力：60psi；?

輔助氣Gas2壓力：50psi；?

去簇電壓(DP)：18V。?

8.根據權利要求7所述的一種蜂蜜中氨基酸的測定方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：?

（1）萃取液的制備：用0.03mol/L的HCl溶解定量的L-正纈氨酸，?配制成含L-正纈氨酸2μmol/L的0.03mol/L的HCl溶液，作為萃取液；?

（2）標準工作溶液制備：用萃取液為溶劑，將17種氨基酸混標Ⅰ和4種氨基酸混合標準儲備液Ⅱ配成不同系列濃度的標準溶液，進行高效液相－串聯質譜檢測；然后以被測物的峰面積與其內標的峰面積的比值Y對被測物的濃度X進行線性回歸，求得各氨基酸的標準曲線；?

（3）樣品制備和分析：準確稱取0.5g待測蜂蜜樣品，放入50mL磨口三角瓶中，準確加入25mL萃取液，超聲15min，取出后搖蕩錐形瓶片刻使其混合均勻，經0.22μm濾膜過濾后進行高效液相－串聯質譜分析；?

色譜條件如下：色譜柱：Agilent?ZORBAX?Eclipse?AAA色譜柱，Agilent?ZORBAX?Eclipse?AAA預柱；流速：0.6mL/min；柱溫：40℃；進樣量：5μL；流動相A：乙腈，流動相B：0.1﹪甲酸；梯度洗脫；?

質譜條件為：離子源：電噴霧電離源（ESI）；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應監測（MRM）；電噴霧電壓：5000V；離子源溫度：350℃；輔助氣Gas1壓力：60psi；輔助氣Gas2壓力：50psi；去簇電壓(DP)：18V。?