[發明專利]用于從標本中對百日咳鮑特菌紅霉素耐藥性進行快速檢測的引物及檢測方法

無效

• 申請號: 201310743682.0
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN103667512A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 王增國;侯鐵軍;杜全麗;劉瑩;習艷麗;李恒新
• 申請（專利權）人: 西安市疾病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 西安智邦專利商標代理有限公司 61211
• 代理人: 姚敏杰

1.一種用于從標本中對所感染的百日咳鮑特菌的紅霉素耐藥性進行快速檢測的引物，其特征在于：所述引物針對百日咳鮑特菌23S?rRNA基因包括2047位點兩側的可變區域。

2.根據權利要求1所述的引物，其特征在于：所述引物的核苷酸序列是：

1505F:5’-GGCACGAGCGAGCAAGTCTC-3’，以及

2118R:5’-TCTGGCGACTCGAGTTCTGC-3’。

3.一種基于如權利要求2所述的引物的對百日咳鮑特菌的紅霉素耐藥性進行檢測的方法，其特征在于：所述方法包括以下步驟：

1）收集百日咳鮑特菌核酸陽性標本；

2）采用如權利要求2所述的引物對步驟1）所得到的百日咳鮑特菌核酸陽性標本的23S?rRNA基因進行PCR擴增，得到擴增結果；

3）對步驟2）所得到的擴增產物進行電泳，并根據電泳結果初步判斷是否擴增到百日咳鮑特菌23S?rRNA基因。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述步驟3）之后還包括：

4）對步驟2）得到的擴增產物進行DNA測序，得到測序結果；

5）根據步驟4）所得到的測序結果與野生型百日咳鮑特菌進行比對，確定步驟1）所采集得到的百日咳鮑特菌核酸陽性標本是否含有對紅霉素耐藥的百日咳鮑特菌。

5.根據權利要求3或4所述的方法，其特征在于：所述步驟1）的具體實現方式是：

1.1）采集臨床百日咳疑似病例的鼻咽拭子標本；

1.2）將步驟1.1）所采集得到的臨床百日咳疑似病例的鼻咽拭子標本放置于0.5ml生理鹽水中并提取DNA；

1.3）通過PCR檢測步驟1.2）所得到的DNA的IS481基因以及ptx-Pr基因；

1.4）若步驟1.3）所得到的兩種基因都呈陽性，則視為百日咳鮑特菌核酸陽性標本。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述步驟2）中進行PCR擴增的具體實現方式是：

PCR反應體系：包含25μl?Hotstar?Taqmaster?mix、1M?Betaine、5μl百日咳鮑特菌核酸陽性標本DNA以及0.5μM的如權利要求2所述的引物；所述PCR反應體系共50μl；

PCR反應條件是：熱循環條件為95℃15分鐘，35個循環的94℃1分鐘，64℃1分鐘，72℃1分鐘，最后延伸72℃10分鐘。

7.一種包含有如權利要求2所述引物的用于對百日咳鮑特菌紅霉素耐藥性進行檢測時的應用。