[發(fā)明專利]大豆疫霉菌對(duì)甲霜靈抗性的AFLP指紋圖譜構(gòu)建

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310738820.6
• 申請(qǐng)日: 2013-12-30
• 公開（公告）號(hào): CN104745677A
• 公開（公告）日: 2015-07-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉淑霞;潘冬梅;杜春玉;魏國(guó)江;沈玉江;國(guó)莉玲;高宇;韓喜財(cái);宋鑫玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 黑龍江省科學(xué)院大慶分院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645
• 代理公司: 無(wú)
• 代理人: 無(wú)

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及大豆疫霉菌對(duì)甲霜靈抗性的AFLP指紋圖譜構(gòu)建。?

【背景技術(shù)】

大豆疫霉菌(Phytophthorasojae)可引起大豆生產(chǎn)中危害極嚴(yán)重的大豆疫霉根腐病，是中國(guó)對(duì)外公布的I類危險(xiǎn)性檢疫對(duì)象，也是內(nèi)檢對(duì)象。大豆疫病已成為我國(guó)大豆生產(chǎn)上的突出問題，給我國(guó)的大豆生產(chǎn)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。?

大豆疫霉菌為土傳真菌，但病菌寄生性強(qiáng)，不能在土壤顆粒上競(jìng)爭(zhēng)生長(zhǎng)和定殖，卵抱子在植株病殘?bào)w和土壤中能存活多年。大豆疫霉菌在利馬豆、玉米粉、V₈汁等培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較快，菌落均勻，邊緣整齊。菌絲寬3～9μm，易卷曲；菌絲體珊瑚狀，分枝近直角，在分枝基部稍繞縮，老熟后產(chǎn)生隔膜；菌絲可形成結(jié)節(jié)狀、膨大體和厚垣抱子。孢囊梗簡(jiǎn)單，頂生游動(dòng)孢子囊；游動(dòng)孢子囊倒梨形和橢圓形，無(wú)乳突；游動(dòng)抱子卵圓形，一端或兩端鈍圓，側(cè)面平滑，有兩根鞭毛。周肇惠等研究證實(shí)卵孢子只產(chǎn)生于帶菌種子的種皮，檢測(cè)大豆種皮存在卵孢子與否可以作為大豆種子帶菌檢測(cè)方法之一。1957年，Bemard發(fā)現(xiàn)了大豆對(duì)大豆疫霉菌存在抗性分化。1959年Hildebrand發(fā)現(xiàn)不同大豆疫霉菌分離物在毒力上有差異，認(rèn)為大豆疫霉菌存在生理株系。1965年Morgan和Hartwig首次報(bào)道了大豆疫霉菌的生理專化型，描述為1號(hào)和2號(hào)小種。1963年育成了含有單抗性Rps-I的大豆商業(yè)品種，此后的十年間抗病品種在美國(guó)北部地區(qū)廣泛推廣種植，大豆疫霉根腐病得到了基本控制。但正是由于這些抗病品種的廣泛應(yīng)用，對(duì)病原菌造成相對(duì)高的選擇壓，加速了大豆疫霉菌的毒力分化。1972年，schmitthenner在美國(guó)北部地區(qū)發(fā)現(xiàn)對(duì)當(dāng)時(shí)推廣的帶有抗病基因的品種Harosoy63具有毒力的分離物，并定名為3號(hào)小種，隨后4～9號(hào)小種也相繼在北部地區(qū)和加拿大被鑒定。此后，在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第一章引言抗病品種一小種互作下新的大豆疫霉菌生理小種便不斷，其變異速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于從1號(hào)、2號(hào)小種到3號(hào)小種的變異。有研究認(rèn)為，在土壤中還可能存在更為豐富的生理小種多樣性，由于田間種植品種的同質(zhì)性較高，存在于土壤中的許多小種尚不能通過田間發(fā)病植株的分離來進(jìn)行檢測(cè)。大豆疫霉菌是具有寄主專化性的致病菌。已有的研究表明，大豆疫霉菌與大豆品種之間的互作具有基因?qū)虻奶卣鳌Ｔ谂c寄主抗病性互作中，大豆疫霉菌毒力也在演變和快速進(jìn)化，新的生理小種不斷出現(xiàn)，而且在大豆抗病性利用越多的地區(qū)，大豆疫霉菌的毒力變異就越快。至2000年，通過在13個(gè)大豆疫霉菌生理小種鑒別寄主上接種鑒定，國(guó)際上已報(bào)道了63個(gè)大豆疫霉菌生理小種，許多研究者還報(bào)道了更多的毒力基因類型。事實(shí)上，一些研究者己直接從土壤中分離鑒別出許多新生理小種。?大豆疫霉菌分離物在實(shí)驗(yàn)室條件下，經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的保存，也會(huì)在致病毒性上發(fā)生變異，產(chǎn)生新生理小種。?

目前，防治大豆疫病主要是通過選用抗病品種和使用化學(xué)藥劑。使用抗病品種是最經(jīng)濟(jì)，有效的防治途徑。但是，目前培育的抗病品種大多為單基因控制的垂直抗性，生產(chǎn)中缺乏有效的持久性抗病品種；同時(shí)大豆疫霉菌的變異常導(dǎo)致抗病品種抗性的喪失，而且目前在商業(yè)上推廣使用的農(nóng)藝性狀好的品種大多都是感病品種，這些因素的存在給大豆抗病品種的培育和推廣帶來了困難。因此，化學(xué)藥劑防治在大豆疫病的防治中占有重要地位。目前大豆疫病已成為我國(guó)大豆生產(chǎn)上的突出問題，給我國(guó)的大豆生產(chǎn)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。?

甲霜靈(Metalaxyl)屬于苯酰胺類內(nèi)吸殺菌劑，具有低毒、高效和持效期長(zhǎng)等特性，尤其對(duì)卵菌綱中的霜霉屬、疫霉屬和腐霉屬的病原菌具有很強(qiáng)的活性。已被廣泛應(yīng)用于包括大豆疫霉菌在內(nèi)的卵菌所致植物病害的防治。但隨著甲霜靈的普遍使用，病原菌的抗藥性問題接踵而來，病原菌的抗藥性發(fā)展速度非常之快，使得病原菌對(duì)甲霜靈的抗藥性問題在同類殺菌劑中也顯得最為突出。實(shí)驗(yàn)表明在甲霜靈的壓力下，我國(guó)大豆疫霉菌在田間可能產(chǎn)生抗性突變體，存在產(chǎn)生抗性群體的風(fēng)險(xiǎn)。到目前為止，已經(jīng)有許多研究方法用于大豆疫霉菌的檢測(cè)鑒定，但現(xiàn)有的大豆疫霉菌檢測(cè)技術(shù)存在許多不足之處，主要是檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性低，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，不適應(yīng)檢疫部門特別是口岸快速檢測(cè)的要求，也無(wú)法通過建立抗性監(jiān)測(cè)體系來指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐。?