[發明專利]參芪降糖制劑HPLC標準指紋圖譜及其構建方法

有效

• 申請號: 201310738333.X
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN103728387A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 歐先濤;廖嫻;李驍翾;黃凱偉;鐘嘉華;魏剛
• 申請（專利權）人: 廣東萬年青制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

技術領域

本發明涉及一種參芪降糖制劑的檢測方法，特別涉及一種參芪降糖制劑HPLC標準指紋圖譜的構建方法，以及由此法得到的參芪降糖制劑HPLC標準指紋圖譜。

背景技術

中藥指紋圖譜系指中藥原料藥材、飲片、半成品、成品等經適當處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標示其特征的共有峰的圖譜。中藥指紋圖譜能客觀地揭示和反映中藥內在質量的整體性和特征性，用以評價中藥的真實性、有效性、穩定性和一致性。中藥的臨床療效并非由單一活性成分的作用或多種活性成分作用的簡單相加，復方制劑更是如此。用已知某一個或幾個活性成分或有效成分為質量指標，通過定性和定量分析來判斷藥品質量的優劣，顯然是不全面的。中藥質量的評價需要綜合的、宏觀的、非線性的質量評價體系，中藥指紋圖譜就是能較好地適應這一特點的一種質量評價與控制模式。在國際上，如日本、德國、美國、加拿大、印度等許多國家，對一些傳統藥、天然藥和草藥，都把指紋圖譜作為質量控制標準的內容之一。歐共體對草藥質量的指南中也稱，單靠測定某有效成分考察質量的穩定性是不夠的，因為草藥及其制劑是以整體為活性物質。世界衛生組織(WHO)在1996年草藥評價指導原則中規定：如果草藥的活性成分不明，可以提供特征色譜圖譜，以證明產品質量的一致。因此指紋圖譜是中藥現代化和國際化的關鍵技術之一。

參芪降糖制劑是純中藥制劑，由人參莖葉皂苷、黃芪、五味子、山藥、地黃、麥冬、茯苓、天花粉、澤瀉、枸杞子、覆盆子十一味藥材組成，具有益氣養陰、滋脾補腎的功效，主治消渴癥，用于II型糖尿病。該藥有調節受體水平作用，對應激性高血糖、胰島損傷性高血糖、糖代謝異常后的脂質過氧化物以及細胞受體有調節代謝作用。且能對人胚肺二倍體細胞的生長與代謝產生影響，特別是對晚代細胞的增殖和細胞內糖元含量有正向促進作用。

中華人民共和國衛生部部標準(WS₃-180(Z-35)-95(Z))所載參芪降糖片質量標準采用薄層色譜法分別以人參皂苷Re、Rg₁、Rb₁對照品和五味子對照藥材在各特定色譜條件下的薄層斑點為對照鑒別，并采用薄層掃描測定人參皂苷Re的含量，其不足之處在于：①所采用的檢測方法步驟繁瑣，而且參芪降糖制劑含有十一味藥材的有效成分，這并不能全面的反映該制劑的化學成分的種類和含量，也不能全面地對該制劑的質量進行監控，沒有對其中主要多味藥材中的化學成分進行全面、系統的檢測。②不能全面監控中間體，成品的質量。

發明內容

為了解決上述問題，本發明建立了一種合理、準確評價參芪降糖片藥品整體性質量的標準指紋圖譜，以及該指紋圖譜的構建方法。

本發明的目的在于提供一種參芪降糖制劑HPLC標準指紋圖譜的構建方法。

本發明的另一目的在于提供參芪降糖制劑HPLC標準指紋圖譜。

本發明所采取的技術方案是：

一種參芪降糖制劑HPLC標準指紋圖譜的構建方法，包括以下步驟：

1)制備參芪降糖制劑供試品溶液：粉碎參芪降糖制劑，置于帶塞的錐形瓶中，加入甲醇，使參芪降糖制劑的濃度為40～60mg/mL，密塞，稱定重量，超聲處理30～60min，功率400W，頻率40KHz，靜置放冷，再稱定重量，用甲醇彌補減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液，置蒸發皿中蒸干，殘渣加去離子水使其溶解，去離子水的體積為濾液的0.4～0.8倍，再用去離子水飽和的正丁醇萃取3～4次，每次使用的去離子水飽和的正丁醇體積為濾液的0.6～1.0倍，合并每次萃取后的正丁醇液，置于蒸發皿中，蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容，搖勻，濾過，取續濾液，即可；

2)對照品溶液的制備：稱取人參皂苷Re、人參皂苷Rg₁、人參皂苷Rd、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、毛蕊花糖苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素，加甲醇溶解，分別制成相對應的對照品溶液；

3)參芪降糖制劑的HPLC指紋圖譜的建立：分別吸取對照品溶液和供試品溶液，進樣，用高效液相色譜儀測定，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相A為乙腈，流動相B為體積百分數為0.1％的磷酸水溶液，線性梯度洗脫，洗脫程序為：

檢測波長為203nm，柱溫為25～35℃，流速為0.8～1.2mL/min，以對照品的色譜峰相對保留時間和峰面積為1，計算供試品的相對保留時間和相對峰面積，即得到參芪降糖制劑HPLC指紋圖譜；