[發明專利]參芪降糖制劑HPLC標準指紋圖譜及其構建方法

有效

• 申請號: 201310738333.X
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN103728387A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 歐先濤;廖嫻;李驍翾;黃凱偉;鐘嘉華;魏剛
• 申請（專利權）人: 廣東萬年青制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

1.一種參芪降糖制劑HPLC標準指紋圖譜的構建方法，其特征在于：包括以下步驟：

1）制備參芪降糖制劑供試品溶液：粉碎參芪降糖制劑，置于帶塞的錐形瓶中，加入甲醇，使參芪降糖制劑的濃度為40~60mg/mL，密塞，稱定重量，超聲處理30~60min，功率400W，頻率40KHz，靜置放冷，再稱定重量，用甲醇彌補減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液，置蒸發皿中蒸干，殘渣加去離子水使其溶解，去離子水的體積為濾液的0.4~0.8倍，再用去離子水飽和的正丁醇萃取3~4次，每次使用的去離子水飽和的正丁醇體積為濾液的0.6~1.0倍，合并每次萃取后的正丁醇液，置于蒸發皿中，蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容，搖勻，濾過，取續濾液，即可；

2）對照品溶液的制備：稱取人參皂苷Re、人參皂苷Rg₁、人參皂苷Rd、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、毛蕊花糖苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素，加甲醇溶解，分別制成相對應的對照品溶液；?

3）參芪降糖制劑的HPLC指紋圖譜的建立：分別吸取對照品溶液和供試品溶液，進樣，用高效液相色譜儀測定，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相A為乙腈，流動相B為體積百分數為0.1%的磷酸水溶液，線性梯度洗脫，洗脫程序為：

檢測波長為203nm，柱溫為25~35℃，流速為0.8~1.2mL/min，以對照品的色譜峰相對保留時間和峰面積為1，計算供試品的相對保留時間和相對峰面積，即得到參芪降糖制劑HPLC指紋圖譜；

4）參芪降糖制劑HPLC?的標準指紋圖譜：高效液相色譜儀測定至少10?批參芪降糖制劑樣品供試品溶液的指紋圖譜，并進行分析比較，得到由共有特征峰構成的指紋圖譜為參芪降糖制劑HPLC?的標準指紋圖譜。

2.根據權利要求1所述的一種參芪降糖制劑HPLC標準指紋圖譜的構建方法，其特征在于：步驟1）所述的參芪降糖制劑的劑型選自片劑、顆粒劑和膠囊劑。

3.根據權利要求1所述的一種參芪降糖制劑HPLC標準指紋圖譜的構建方法，其特征在于：步驟1）所述的參芪降糖制劑由人參莖葉皂苷、黃芪、五味子、山藥、地黃、麥冬、茯苓、天花粉、澤瀉、枸杞子、覆盆子11味藥材制成。

4.根據權利要求1所述構建方法構建的參芪降糖制劑HPLC標準指紋圖譜，其特征在于：該指紋圖譜中有38?個共有特征峰，從左到右編號為1至38，以編號28特征峰為參照峰分別計算其他共有特征峰相對保留時間，編號為1至38的特征峰相對保留時間依次分別為：0.105~0.111?min、0.115~0.121?min、0.127~0.135?min、0.154~0.162?min、0.165~0.171?min、0.246~0.251?min、0.336~0.339?min、0.368~0.370?min、0.438~0.441?min、0.542~0.544?min、0.546~0.547?min、0.590~0.592?min、0.596~0.598?min、0.616~0.622?min、0.694~0.698?min、0.708~0.710?min、0.770~0.772?min、0.813~0.819?min、0.890~0.892?min、0.904~0.906min、0.915~0.917?min、0.929~0.931?min、0.936~0.938?min、0.938~0.942?min、0.954~0.956?min、0.962~0.966?min、0.967~?0.969?min、1.000?min、1.105~1.017?min、1.048~1.409?min、1.098~1.099?min、1.180~1.182?min、1.269~1.271?min、1.324~1.326?min、1.367~1.369?min、1.403~1.406?min、1.440~1.442?min、1.473~1.475?min。

5.根據權利要求4所述的參芪降糖制劑HPLC標準指紋圖譜，其特征在于：所述的編號分別為1至38的38?個共有特征峰中：

歸屬于人參莖葉皂苷的特征峰編號為15、16、18、19、20、21、23、25、26、27、28、30、32一共13個，其中15號峰為人參皂苷Rg₁、16號峰為人參皂苷Re、28號峰為人參皂苷Rd；

歸屬于黃芪的特征峰編號為10、17、22、24一共4個，其中10號峰為毛蕊異黃酮葡萄糖苷、24號峰為黃芪甲苷；

歸屬于五味子的共有峰編號為5、29、31、33、34、35、36一共7個，其中29號峰為五味子醇甲、35號峰為五味子甲素、36號峰為五味子乙素；

歸屬于地黃的特征峰編號為11、12、14一共3個，其中12號峰為毛蕊花糖苷；

歸屬于覆盆子的特征峰編號為7、13、37、38一共4個。