[發(fā)明專利]海帶配子體低溫冷凍保存方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310738266.1
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN103725641A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發(fā)明（設計）人: 羅世菊;錢瑞;武瑞娜;李言;賽珊;王利芹;趙聚萍;崔翠菊;李曉捷;李霞
• 申請（專利權）人: 山東東方海洋科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01N3/00
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 鄭自群

1.一種海帶配子體低溫冷凍保存方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）材料處理：將培養(yǎng)保存的配子體克隆系進行超聲粉碎后，在溫度8-10℃、光強500-800Lux、光時24h條件下預培養(yǎng)10天，得處理好的配子體克隆系材料；

（2）平衡：取體積分數(shù)為10%DMSO溶液1mL加入凍存管中，進行預先冷凍，向預先冷凍的凍存管中再加入0.8mL的10%DMSO溶液，使凍存管中DMSO處于固液混合物狀態(tài)，然后向凍存管中加入步驟1處理好的配子體克隆系材料，0-4℃下平衡30min；

（3）冷凍保存：將平衡后的配子體材料放入-80℃低溫冰箱冷凍；

（4）復蘇：將-80℃低溫冷凍保存的凍存管快速放入恒溫水浴中進行快速解凍，解凍后配子體材料經(jīng)煮沸后冷卻的低溫海水洗滌去除DMSO，移入培養(yǎng)液中培養(yǎng)。

2.根據(jù)權利要求1所述的海帶配子體低溫冷凍保存方法，其特征在于：步驟（1）中所述的配子體克隆系為雌雄小団狀配子體克隆系；所述的超聲粉碎是在超聲6s、間隔5s，超聲2次，功率200-300w的程序進行超聲波處理1次。

3.根據(jù)權利要求1所述的海帶配子體低溫冷凍保存方法，其特征在于：步驟（2）中所述的預先冷凍是指在-20℃冰箱中冷凍。

4.根據(jù)權利要求1所述的海帶配子體低溫冷凍保存方法，其特征在于：步驟（4）中所述的恒溫水浴的溫度為38-39℃，時間為使凍存管中冰晶完全消失為止。

5.根據(jù)權利要求2所述的海帶配子體低溫冷凍保存方法，其特征在于：所述的雌雄小団狀配子體克隆系來源于國家海藻工程技術研究中心種質(zhì)資源室。