[發明專利]一種mPEG-SPA-pGLP-2復合物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201310737735.8
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN103724424A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 齊珂珂;徐子偉;吳杰
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/18;A61K38/26;A61K47/48;A61P1/00
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司 33214
• 代理人: 王從友

1.一種mPEG-SPA-pGLP-2復合物，其特征在于：由豬胰高血糖素樣肽-2（pGLP-2）與單甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亞胺丙酸酸酯（mPEG-SPA）通過加成反應連接構成，所述pGLP-2第30位的Lys與所述mPEG-SPA的末端雙鍵形成共價鍵而連接。

2.根據權利要求1所述的一種mPEG-SPA-pGLP-2復合物，其特征在于：所述pGLP-2的氨基酸序列為：His-Ala-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Val-Leu-Asp-Asn-Leu-Ala-Thr-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Leu-His-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp-Ser-Leu-NH₂。

3.根據權利要求1或2所述的一種mPEG-SPA-pGLP-2復合物，其特征在于：單甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亞胺丙酸酸酯的分子量為5~20KD。

4.一種制備權利要求1~3任意一項權利要求所述的mPEG-SPA-pGLP-2復合物的方法，其特征在于該方法包括以下的步驟：

1）將pGLP-2制備成pH為7.5-9.0的溶液；

2）將步驟1）制備的pGLP-2溶液與mPEG-SPA反應，所述pGLP-2與mPEG-SPA的摩爾比為1：1~1：8，反應溫度為4~37℃，反應時間為0.5~24小時；

3）分離純化，得到mPEG-SPA-pGLP-2復合物。

5.根據權利要求4所述的mPEG-SPA-pGLP-2復合物的制備方法，其特征在于：步驟1）將pGLP-2溶解于50?mmol/L?pH?7.5~9.0的Tris-HCl緩沖液中，終濃度為1.2?mg/mL。

6.根據權利要求4所述的mPEG-SPA-pGLP-2復合物的制備方法，其特征在于：步驟2）中加入1%的TFA終止反應。

7.根據權利要求4所述的mPEG-SPA-pGLP-2復合物的制備方法，其特征在于：步驟3）分離純化采用弱酸性陽離子交換樹脂層析法；優選，所述的弱酸性陽離子交換樹脂采用C?M?Sepharose?Fast?Flow層析柱。

8.根據權利要求7所述的mPEG-SPA-pGLP-2復合物的制備方法，其特征在于：將步驟2）制備的粗品溶液用20?mmol/L?pH?4.0的醋酸緩沖液稀釋10倍，上C?M?Sepharose?Fast?Flow層析柱，用含1?mol/L?NaCl的20?mmol/L?pH?4.0的醋酸緩沖液進行0%?到100%的梯度洗脫，流速為1?mL/min，在波長為215?nm處收集3個吸收峰中的第2和第3個吸收峰的洗脫溶液；將收集到的洗脫溶液用截留分子量為3~10KD的Millipore?Amicon?Ultra超濾管濃縮，并除去NaCl，冷凍干燥，第3個吸收峰即為mPEG-SPA-pGLP-2復合物。

9.權利要求1-3中任意一項所述的mPEG-SPA-pGLP-2復合物用于制備治療和預防仔豬腸道功能紊亂藥物中的應用。

10.權利要求1-3中任意一項所述的mPEG-SPA-pGLP-2復合物用于制備治療豬腸道疾病藥物中的應用。