[發明專利]一種新霉素的發酵工藝

在審

• 申請號: 201310737547.5
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN103695504A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 沈聯兵;姚明高;鄭興
• 申請（專利權）人: 宜昌三峽制藥有限公司
• 主分類號: C12P19/52
• 分類號: C12P19/52
• 代理公司: 宜昌市三峽專利事務所 42103
• 代理人: 成鋼

技術領域

本發明涉及一種新霉素的發酵工藝，屬于生物技術領域。

背景技術

國內現有的新霉素發酵使用的氮源類物質其原料種類較多，我公司對其進行了工藝改進，在利用新霉素發酵罐新配方（改進工藝）上罐以來，生產存在以下不穩定因素，難以實現真正的穩定生產。例如，發酵液前期粘度不夠，菌體對數生長期時間較長，糖耗速率較慢。分析原因，新霉素發酵進行新配方生產上罐，不能僅僅只是對發酵罐配方進行優化，還要對發酵生產全過程的一系列工藝進行優化，如對種子液質量控制，中間補料控制等工藝進行全面優化，以達到適應新配方生產要求。因此需改進新霉素發酵液生產中工藝控制的方法，從而達到穩定生產。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新霉素的發酵工藝，解決發酵過程中發酵液的粘度和畸形代謝問題，提高發酵液代謝狀況及發酵生產水平均。

本發明是這樣實現上述目的：

一種新霉素的發酵工藝，包括如下步驟：

1.將砂土孢子經密封，干燥，于0～4℃貯藏5～10天，再置于28±2℃，4～12天培養制得斜面孢子懸浮液；

2.將斜面孢子懸浮液放入預先設置種子培養基的種子罐中培養36～48h得到培養液，所述的種子罐中黃豆粉的質量含量為種子培養基的1.0～3.3%。

3.將經步驟2得到的種子培養液送入預先設置發酵培養基的發酵罐中接種，并在30-35℃條件下發酵110～130h得到發酵液，種子培養液進入發酵罐后，通入空氣，將空氣通入流量控制為500～1000m³/h，并通入1～30h；增大空氣的通入量，將空氣通入流量控制為1600～1700m³/h，并通入15～30h，并補充糖料；進一步增大空氣通入量，將空氣通入流量控制為2400～3000m³/h，并通入30～50h，并控制發酵液黏度為40～45sPs；降低空氣的通入量，將空氣通入流量控制為1200～1600m³/h，并通入15～20h。

所述的發酵罐內發酵培養基新老配方工藝改進對比表

在生產實踐中，新配方生產中對種子罐轉罐種子液的質量要求很高，以往能適應老配方上罐的種子液，如今已不能在新配方上罐后實現正常生產。由于新配方發酵生產中，有物料較稀且含有機速效氮源類物料少特點，處于對數生長期的種子液轉入發酵罐后，需要快速消耗易消耗的有機糖、氮源類物質，在發酵生產前期快速生長繁殖，而發酵新配方不能滿足此工藝要求。

所述的補料配方中，將原糖料配方中的酵母粉比例由1.25%提升到1.6%；增加蛋白胨，比例1-2%；將糖料配方中的淀粉、米粉比例由25-30%降低到10-16%，具體為：

針對新配方特點，新配方由于物料相對較少，營養物缺少，當種子培養液轉入發酵罐后，前期營養物被迅速消耗，發酵生產通過補料來供給持續生長代謝，使發酵前期迅速生長繁殖，對補料培養基的優化控制與調整中，減少碳源類物料如淀粉和米粉，而增加少部分有機速效氮源類物料如酵母粉和蛋白胨，調整后與另一未調整的配方間隔使用，經此工藝優化后發酵液生長代謝更加迅速，發酵過程中間補料量增加更明顯，發酵液體積及發酵單罐總億產出更高，提高生產水平，降低生產成本。

4.終止發酵液的培養，控制發酵液的體積為發酵罐總體積的3/4～5/6；將發酵液放入吸附罐，并向發酵液中加入732樹脂，稀釋發酵液濃度至13000u/ml以下，中和pH值6.4～7.0制得稀發酵液，完成發酵步驟。

本發明提供的一種新霉素發酵生產工藝控制的方法，有益效果如下：

本項發明中工藝優化控制產生的直接經濟效益如下：

1、進行工藝優化后，發酵罐新配方生產順利實現。

2、進行工藝優化后，取得經濟效益主要表現以下幾個方面。

（1）、發酵生產水平提高，平均效價提高15％，發酵液產量大幅增加，在工藝優化前生產平均每月發酵液產量為108000十億，而進行工藝優化后產量可達到112000十億～115000十億，按每月至少增加5000十億產量計，則每月可純經濟效益60萬元以上。（銷售價120元/十億計），每年可創純經濟效益720萬元以上。

（2）、補料控制的糖料配方改進工藝運用的成本節約：

每月平均上糖料總計120批：50T糖料55批，25T糖料65批。

每月改進糖料配方數：