[發明專利]一種用于檢測豬細小病毒和豬圓環病毒2型病毒及其混合感染的試劑盒和方法

有效

• 申請號: 201310737274.4
• 申請日: 2013-12-24
• 公開（公告）號: CN103820572A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 張志剛;董劍輝;張文利;張曉杰;李爽
• 申請（專利權）人: 北京偉嘉人生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
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1.一種用于檢測豬細小病毒和豬圓環病毒2型病毒及其混合感染的試劑盒和方法，其特征在于檢測豬細小病毒和豬圓環病毒2型的核苷酸引物為PPVF、PPVR、PCV2F和PCV2R，其中序列PPVF和PPVR分別為檢測豬細小病毒的正義引物和反義引物，序列PCV2F和PCV2R分別為檢測豬圓環病毒2型的正義引物和反義引物。

2.根據權利要求1所述的一種用于檢測豬細小病毒和豬圓環病毒2型病毒及其混合感染的試劑盒和方法，其特征在于，所述的試劑盒由以下組分組成：

(1)DNA提取試劑；

(2)2×PCR?Mix：由dNTP、MgSO₄、KCl、Tris-Cl緩沖液和Taq?DNA聚合酶等組成；

(3)引物混合液：內含終濃度為12μM的豬細小病毒正義引物和反義引物，同時含終濃度為10μM的豬圓環病毒2型正義引物和反義引物。

(4)DNA陽性對照；

(5)陰性對照：DEPC水；

(6)高壓滅菌水；

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述DNA提取試劑為DNA提取試劑盒。

4.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，其中所述2×PCR?Mix包含終濃度為0.4mM的dNTP、4.0mM的MgSO₄、80mM的KCl、20mM的Tris-Cl和0.1U／μL的Taq?DNA聚合酶，所述的檢測豬細小病毒正義引物和反義引物終濃度均為12μM，所述的檢測豬圓環病毒2型的正義引物和反義引物終濃度均為10μM。

5.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，其中所述陽性對照包含30μg／mLPPV和30μg／mLPCV2。

6.一種用于檢測豬細小病毒和豬圓環病毒2型病毒及其混合感染的方法，其特征在于所述的方法包括如下步驟：

(1)提取樣品總DNA；

(2)用權利要求1中所述引物對待測樣本進行PCR擴增；

(3)電泳；

(4)結果分析。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，PCR擴增反應體系為：2×PCR?Mix12.5μL、引物混合液2μL、模板1μL、高壓滅菌水9.5μL，總體積25μL；擴增條件為94℃預變性5min，94℃變性30S，57℃退火30S，72℃延伸45S，循環35cycles；最后72℃延伸8min。