[發(fā)明專利]一種補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚羥基化衍生物及合成方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310733691.1
• 申請(qǐng)日: 2013-12-23
• 公開（公告）號(hào): CN103724309A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王敏;駱健美;申雁冰;梁奇坤;鄭宇;王家明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D311/32
• 分類號(hào): C07D311/32;C12P17/06;A61P35/00;C12R1/67;C12R1/645
• 代理公司: 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 趙瑤瑤

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物制藥及醫(yī)藥工程領(lǐng)域，尤其是一種補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚羥基化衍生物及合成方法。

背景技術(shù)

補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚（Bavachinin）是一種二氫黃酮類化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是在二氫黃酮骨架的A環(huán)7號(hào)位取代了一個(gè)甲氧基，A環(huán)6號(hào)位取代了一個(gè)異戊烯基。研究表明，該化合物具有抗氧化、抗細(xì)菌、抗真菌、抗炎、抗腫瘤、退熱性、止痛等多種生物和藥理活性。目前主要從天然植物Psoralea?corylifolia中分離得到，但由于較低的分離和純化效率，生產(chǎn)成本較高，導(dǎo)致其臨床應(yīng)用受到極大限制。因此，通過(guò)結(jié)構(gòu)修飾和改造獲得結(jié)構(gòu)多樣的新化合物，是提高該化合物生物利用度的重要方法。

對(duì)于二氫黃酮類化合物，羥基基團(tuán)的存在和位點(diǎn)與它的藥理活性密切相關(guān)。但利用化學(xué)方法制備這類芳香族化合物的羥基化衍生物需要經(jīng)過(guò)多個(gè)步驟，反應(yīng)效率較低。由于C-H轉(zhuǎn)化為C-OH的反應(yīng)是許多芳香族化合物氧化代謝的關(guān)鍵特征，因此，可以通過(guò)微生物轉(zhuǎn)化法實(shí)現(xiàn)這類化合物的一步羥基化。

目前，尚無(wú)利用微生物菌種制備補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚羥基化衍生物的生物合成方法的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚羥基化衍生物及合成方法，本方法具有反應(yīng)條件溫和、易于控制、無(wú)污染、目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)率高、分離純化過(guò)程簡(jiǎn)單、成本低廉、安全性高等優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明實(shí)現(xiàn)目的的技術(shù)方案如下：

一種補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚羥基化衍生物，結(jié)構(gòu)式如下：

一種補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚羥基化衍生物的方法，以補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚為底物，采用黃曲霉ATCC3089或雅致小克銀漢霉CICC4025為生物催化劑進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，獲得在補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚A環(huán)C2”,C3”位點(diǎn)形成兩個(gè)羥基的衍生物。

而且，步驟如下：

⑴生物催化劑的制備：無(wú)菌水制備濃度為10⁵-10⁸個(gè)/ml的生物催化劑的孢子懸浮液，以5%-15%的接種量接種于新鮮的發(fā)酵培養(yǎng)基中，26-30℃，120-200r/min培養(yǎng)12-48h，得到菌體發(fā)酵液；

⑵轉(zhuǎn)化反應(yīng)：向菌體發(fā)酵液中投入溶解的補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚，26-30℃，120-200r/min培養(yǎng)24-120h后終止反應(yīng)；

⑶產(chǎn)物的提取與精制：轉(zhuǎn)化反應(yīng)結(jié)束后，抽濾，分離菌絲體和發(fā)酵液，分別用有機(jī)溶劑萃取菌絲體和發(fā)酵液，合并萃取液，干燥，減壓濃縮，濃縮后用硅膠色譜柱分離獲得補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚羥基化衍生物。

而且，將步驟⑶獲得的產(chǎn)物是利用有機(jī)溶劑通過(guò)重結(jié)晶得到補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚在A環(huán)C2’，C3’位點(diǎn)形成兩個(gè)羥基的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的純品。

而且，所述黃曲霉ATCC3089發(fā)酵培養(yǎng)采用的培養(yǎng)基組成g/L:葡萄糖5-30，玉米漿5-10，NaNO₃1-2，KH₂PO₄1-2，K₂HPO₄2-3，MgSO₄0.5-1，F(xiàn)eSO₄0.02-1，KCl0.5-1，pH7.0-8.0。

而且，所述雅致小克銀漢霉CICC4025發(fā)酵培養(yǎng)采用的培養(yǎng)基組成g/L:葡萄糖5-30，玉米漿5-35,(NH₄)₂SO₄2-8,酵母粉1-4,pH4.0-6.0。

而且，所述補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚投入的終濃度為：0.01-0.1g/L。

而且，所述的用于萃取處理的有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、正丁醇、甲醇或乙酸丁酯。

而且，所述用于重結(jié)晶的有機(jī)溶劑為石油醚、丙酮、正己烷、乙腈或甲醇。

補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚羥基化衍生物作為制備抗腫瘤藥物的應(yīng)用。

本發(fā)明的有益效果和積極效果如下：

1、本發(fā)明提供了一種補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚羥基化衍生物的生物合成方法，本方法以補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚為底物，采用黃曲霉ATCC3089或雅致小克銀漢霉CICC4025為生物催化劑，轉(zhuǎn)化生成在補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚A環(huán)C2”,C3”位點(diǎn)形成兩個(gè)羥基的衍生物，本方法克服了現(xiàn)有化學(xué)方法制備這類羥基化衍生物過(guò)程中反應(yīng)步驟多、反應(yīng)效率低、產(chǎn)物分離純化困難等缺點(diǎn)，具有目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)率高、分離純化過(guò)程簡(jiǎn)單、成本低廉、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，是首次利用微生物轉(zhuǎn)化法對(duì)補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚進(jìn)行羥基化反應(yīng)發(fā)明。