[發明專利]一種凡納對蝦SWD基因亞型Lv-SWDi、其編碼的氨基酸序列以及克隆方法

無效

• 申請號: 201310733006.5
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN103981188A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: 杜志強;林濤;吳燁
• 申請（專利權）人: 內蒙古科技大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/10;C07K14/435
• 代理公司: 包頭市專利事務所 15101
• 代理人: 莊英菊

技術領域

本發明涉及一種凡納對蝦SWD基因亞型Lv-SWDi、其編碼的氨基酸序列以及克隆方法，屬于分子生物學技術領域。

背景技術

在動物進化過程中，隨著外界環境中病原細菌和病毒等微生物的不斷刺激造成的各種挑戰，動物自身的免疫系統也在不斷進化，從而能夠使物種進化、延續到今天。到目前為止，依據動物體所處進化地位的高低，已經形成了兩大類免疫系統，一類是先天免疫系統，另一類是獲得性免疫系統。先天免疫系統主要存在于無脊椎動物體內，然而，獲得性免疫系統主要存在于高等的脊椎動物體內，而且，高等的脊椎動物體內仍然存在先天免疫。

對于甲殼類動物來說，先天免疫系統是它們防御細菌、真菌、病毒侵染的唯一防線，尤其是細胞免疫和體液免疫兩種免疫方式，它們和甲殼類動物自身的物理屏障共同擔負著所有的免疫防御功能。先天免疫系統中的細胞免疫和體液免疫，在防御病原入侵的過程中，幾乎是協同作用的，但是，也有些文獻報道稱在病原入侵的最初階段，主要是體液免疫起到了主要的免疫監視和防衛作用。體液免疫在發揮作用的過程中，受到了多種信號途徑的調節，包括目前研究的十分清楚的Toll途徑和IMD途徑，在這兩條信號途徑的末端存在著多種免疫效應分子來執行免疫防御功能。其中，抗菌肽分子是一類非常重要的能夠針對細菌和真菌的入侵發揮免疫效應的分子，而且，它也是甲殼類無脊椎動物與免疫反應相關的多種信號通路的最終發揮清除作用的最主要的功能分子。目前，發現的抗菌肽分子種類繁多，其中有一類分子的結構比較典型，在其氨基酸序列中存在著一個乳清酸性蛋白結構域，簡稱WAP結構域，這個結構域的特點就是存在著由8個半胱氨酸殘基形成的4對二硫鍵。根據分子中存在的WAP結構域的個數，我們人為地將其分為具有單個WAP結構域的抗菌肽分子或者稱為SWD抗菌肽分子、具有雙WAP結構域的抗菌肽分子或者稱為DWD抗菌肽分子。

多數抗菌肽分子不僅可以在甲殼類動物體內發揮清除細菌、真菌的作用，也可以在體外行使抗菌功能以及蛋白酶活性抑制劑作用。因此，一旦將甲殼類動物內源性的抗菌肽進行體外表達與純化，這些蛋白質其在食品行業的抗菌方面就會具有非常廣闊的應用前景，它們可以成為良好的綠色無污染的食品抗菌制劑。此外，與目前我國醫療行業廣泛使用的抗生素、抗菌劑有著很大的不同，源于甲殼類動物的抗菌肽分子發揮抗菌作用的同時，不會引起耐藥性問題，因為抗菌肽分子發揮作用的過程是直接作用于細菌、真菌細胞壁的某一部位的氨基酸序列，從而引起細菌、真菌細胞壁某一部位的水解產生漏洞因而引起細菌、真菌細胞的內溶物外泄，使其死亡而被清除，所以，這類抗菌肽分子在醫藥行業也存在較大的應用前景。

凡納對蝦是上世紀九十年代由美國引進我國的一個蝦類品種，目前，在我國養殖規模非常大，是一類經濟價值較高的水產養殖動物。而且，這類蝦的優良的抗病品質，在養殖過程中發揮了巨大作用，使我國水產養殖業能夠良性發展。此外，凡納對蝦在科研研究方面也是一個十分典型的甲殼類模式生物，它的優良的抗菌和抗病毒品質一直是先天免疫相關研究人員重點追蹤的科學問題。凡納對蝦SWD基因亞型Lv-SWDi編碼的抗菌肽分子在動物體內先天免疫系統中是一類重要的免疫效應分子，尤其，Lv-SWDi抗菌肽分子的蛋白酶活性抑制劑作用在體外可以抑制細菌繁殖過程中產生的蛋白酶的活性，從而將細菌分泌蛋白酶水解環境中的有機物從而獲得可吸收的營養物質的途徑徹底切斷，將細菌活活餓死，而且這種蛋白酶活性抑制劑作用不存在專一性，Lv-SWDi抗菌肽分子的蛋白酶活性抑制劑作用具有廣泛的抑制效果，凡是細菌繁殖過程中產生的蛋白酶的活性都可以被徹底抑制，因而，具有光譜抑制作用。所以，SWD基因亞型Lv-SWDi編碼的凡納對蝦SWDi抗菌肽分子在食品抗菌、醫療抗生素方面具有良好的應用空間。

發明內容

本發明的目的在于提供一種凡納對蝦SWD基因亞型Lv-SWDi的核苷酸序列，其核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1，具有421bp。

本發明的另一個目的在于提供一種凡納對蝦SWD基因亞型Lv-SWDi編碼的氨基酸序列，其氨基酸序列為SEQ?ID?NO.2，具有92個氨基酸殘基。

同時，本發明還提供該凡納對蝦SWD基因亞型Lv-SWDi基因的克隆方法。

本發明所提供的SWD基因亞型Lv-SWDi來源于凡納對蝦（Litopenaeus?vannamei），命名為Lv-SWDi基因，其核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1，具有421bp。