[發(fā)明專利]一種凡納對(duì)蝦SWD基因亞型Lv-SWDi、其編碼的氨基酸序列以及克隆方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310733006.5
• 申請(qǐng)日: 2013-12-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103981188A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜志強(qiáng);林濤;吳燁
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/12
• 分類號(hào): C12N15/12;C12N15/10;C07K14/435
• 代理公司: 包頭市專利事務(wù)所 15101
• 代理人: 莊英菊

1.一種凡納對(duì)蝦SWD基因亞型Lv-SWDi，其特征在于，其核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種凡納對(duì)蝦SWD基因亞型Lv-SWDi，其特征在于，凡納對(duì)蝦SWD基因亞型Lv-SWDi編碼的蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.2。

3.一種凡納對(duì)蝦SWD基因亞型Lv-SWDi的克隆方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）選用凡納對(duì)蝦作為實(shí)驗(yàn)材料，利用動(dòng)物總RNA提取試劑盒提取多種組織的總RNA，獲得凡納對(duì)蝦各種組織的總RNA樣品；

（2）以步驟（1）獲得的總RNA樣品作為模板，利用一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑盒進(jìn)行cDNA的反轉(zhuǎn)錄合成，獲得凡納對(duì)蝦各個(gè)組織的cDNA樣品；

（3）設(shè)計(jì)擴(kuò)增凡納對(duì)蝦SWD基因亞型Lv-SWDi編碼區(qū)的前后引物L(fēng)v-SWDi-F和Lv-SWDi-R：

Lv-SWDi-F：5′-TACTCAGAATTCATGGTGTCCATCAAGGCAGTTC-3′

Lv-SWDi-R：5′-TACTCACTCGAGTTACCTTCCACTTCCGTAAG-3′

以步驟（2）中的凡納對(duì)蝦的各個(gè)組織的cDNA樣品作為模板，以Lv-SWDi-F和Lv-SWDi-R作為擴(kuò)增反應(yīng)的引物對(duì)，進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)的程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min，94℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，循環(huán)35圈，后延伸5min，獲得PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

（4）將步驟（3）獲得的PCR反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行回收、純化，之后進(jìn)行EcoRⅠ核酸內(nèi)切酶和XhoⅠ核酸內(nèi)切酶的雙酶切處理，并且與經(jīng)過(guò)EcoRⅠ核酸內(nèi)切酶和XhoⅠ核酸內(nèi)切酶雙酶切處理的大腸桿菌pET-28a質(zhì)粒載體連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α克隆菌株感受態(tài)細(xì)胞之后，進(jìn)行菌落PCR篩選，將篩選得到的陽(yáng)性克隆子送測(cè)序公司進(jìn)行序列測(cè)定，獲得凡納對(duì)蝦SWD基因亞型Lv-SWDi的基因序列。

（5）將步驟（4）獲得的基因序列，利用分子生物學(xué)翻譯軟件進(jìn)行氨基酸序列的翻譯，獲得對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)的氨基酸序列。