[發(fā)明專利]一種G6PD缺乏癥基因檢測膜條以及PCR引物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310730702.0
• 申請日: 2013-12-26
• 公開（公告）號: CN103695554A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陸小梅;黎四平;李文瑞;彭琪
• 申請（專利權(quán)）人: 東莞市石龍博愛醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 東莞市華南專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44215
• 代理人: 卞華欣

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)上葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（glucose-6-phosphate?dehydrogenase,?G6PD）缺乏癥用的基因檢測膜條及相關(guān)引物，具體涉及一種G6PD缺乏癥基因檢測膜條以及用于擴增待檢樣品基因片段的PCR引物。

背景技術(shù)

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（glucose-6-phosphate?dehydrogenase,?G6PD）缺乏癥是全球最常見的一種X連鎖不完全顯性遺傳病，估計全球有4億人受累。該病的高發(fā)區(qū)包括地中海沿岸、非洲、東南亞及我國的南部省區(qū)。G6PD缺乏癥臨床上表現(xiàn)為新生兒黃疸、蠶豆病、藥物性溶血、感染性溶血和非球形細(xì)胞溶血性貧血等疾病，在兒童及嬰幼兒期集中表現(xiàn)為蠶豆病和新生兒黃疸，往往病情較重，如不及時救治將危及患兒生命。

目前臨床上常用的G6PD缺乏癥檢測方法包括高鐵血紅蛋白還原試驗、G6PD活性試驗、G6PD定量比值法等，這些化學(xué)試驗方法過程簡單、價格低廉，適宜在基層醫(yī)院開展，但準(zhǔn)確性較差，存在假陽性或假陰性，特別對隱性攜帶者的孕婦易漏診，從而造成未對出生的患兒進(jìn)行應(yīng)有的臨床指導(dǎo)，危及患兒的健康或生命。

在本申請之前，已有用PCR-膜條雜交技術(shù)方法檢測G6PD基因突變的技術(shù)方法，其中中國授權(quán)專利，專利號為：201110069362，公開了一種方法能檢測12種突變類型，分別為：A95G、G392T、G487A、A493G、C592T、G871A、C1004T、C1024T、G1376T、G1381A、C1387T、G1388A。中國授權(quán)專利，專利號為：201210363243專利公開了一種方法能檢測13種突變類型，分別為：A95G、G392A、A493G、C592T、G871A、C1004T、C1024T、C1311T、C1360T、G1376T、G1381A、C1387T、G1388A。這兩個專利都未包括中國人群中較為重要的突變類型，因此，以上兩個專利的產(chǎn)品都將造成較為嚴(yán)重的漏檢，可導(dǎo)致影響部分患者的生命和健康的嚴(yán)重后果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種G6PD缺乏癥基因檢測膜條，其檢測范圍為17個突變位點共20種突變類型（其中三個突變位點各有兩種突變類型），不僅包括了現(xiàn)有技術(shù)中的所有突變類型，而且增加了中國人群中較為重要的突變類型。因此，應(yīng)用本申請產(chǎn)品進(jìn)行檢測，將大大降低患者漏檢的頻率，保護(hù)患者生命和健康，并且該檢測膜條檢測迅速準(zhǔn)確，極少出現(xiàn)假陽性或假陰性。

本發(fā)明的另一發(fā)明目的是，提供用于擴增待檢樣品基因片段的PCR引物，該PCR引物針對17個突變位點共20種突變類型重新設(shè)計得出，完全根據(jù)中國人群突變頻率較高的的突變基因型T517C、C519T、C519G、A835G、A835T、C1004A設(shè)計，準(zhǔn)確率高，與探針的結(jié)合性能好，擴增速率快，對于臨床檢測具有很強的臨床指導(dǎo)意義。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種G6PD缺乏癥的基因檢測膜條，包括基底膜條以及在所述基底膜條上固定有特異性的突變探針和正常對照探針，共包括20條突變探針和13條正常對照探針，20個突變探針對應(yīng)共17個突變位點，所述20條突變探針分別為：A95G、G392T、G487A、A493G、T517C、C519T、C519G、C592T、A835G、A835T、G871A、C1004T、C1004A、C1024T、C1311T、C1360T、G1376T、G1381A、C1387T、G1388A。

其中，所述突變探針的3’端或5’端帶有氨基標(biāo)記，所述突變探針的具體序列為：

A95G???????GGATACACGCATATTCATCA

G392T???????CTCCACCTGGTGTCACAG

G871A???????AGGTCAAGATGTTGAAATG

C1004T???CACCACCGTCACTTTTGCA

C1004A???CACCACCGACACTTTTGCA

C1024T??????AGCCGTCGTCTTCTATGT

C1360T???GCACTTCGTGTGCAGGTGA

G1376T???GAGCTCCTTGAGGCCTGG

G1381A??GAGCTCCGTGAGACCTGG

C1387?A??CCTGGAGTATTTTCACCCC

G1388A??CCTGGCATATTTTCACCCC