[發明專利]一種從尿液中制備人血白蛋白的方法

有效

• 申請號: 201310729720.7
• 申請日: 2013-12-26
• 公開（公告）號: CN103694343A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 苗丕渠;侯曉彥;池正昌;沈小寧
• 申請（專利權）人: 揚州艾迪生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/22;C07K1/20;C07K1/18
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 謝東

1.一種從尿液中制備人血白蛋白的方法，收集已吸附尿蛋白的樹脂，進行清洗處理，其特征在于，還包括如下步驟：?

a）尿蛋白解吸附，得到尿蛋白濃縮液；

b)采用平衡液平衡好的金屬螯合親和層析柱層析，沖洗液洗脫收集洗脫峰；?

c)采用平衡液平衡好的陰離子層析柱層析，上樣上一步的洗脫峰，沖洗液洗脫收集洗脫峰；?

d)采用平衡液平衡好的疏水層析柱層析，上樣上一步的洗脫峰，沖洗液洗脫收集洗脫峰；?

e)采用平衡液平衡好的陰離子交換層析，上樣上一步的洗脫峰，沖洗液洗脫收集洗脫峰，得到人血白蛋白。

2.根據權利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟a）利用0.5－1.5M的NaCl溶液進行尿蛋白的解吸附。

3.根據權利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟d）和步驟e）之間增加一個去病毒步驟，調節步驟d）中的洗脫液蛋白質濃度至20%－25%，加入辛酸鈉作為保護劑，進行60℃加熱處理10小時。

4.根據權利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟b）中金屬螯合親和層析柱的螯合金屬離子是Cu²⁺、Zn²⁺、Ni²⁺、Fe³⁺中的任意一種。

5.根據權利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟b）中尿蛋白濃縮液上金屬螯合親和層析柱之前超濾濃縮，調節pH4－8，電導0.5－10mS/cm，平衡液為0.02－0.2M醋酸鹽或磷酸鹽緩沖液，NaCl濃度為0.2－2.0M，洗脫液為?0.02－0.2M磷酸鹽溶液，0.5－1.5M?NH₄Cl，pH6.0－8.4。

6.根據權利要求5所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，在洗脫之前加入沖洗步驟，用pH5.0－8.0，NH₄Cl濃度≤0.5M的沖洗液沖洗金屬螯合親和層析柱，所述的沖洗液緩沖介質為0.02－0.2M磷酸鹽或者醋酸鹽。

7.根據權利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟c）中的陰離子層析柱平衡液為0.02－0.2M磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液，pH5－8；洗脫液為0.05－1.0M磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液，pH4－8。

8.根據權利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟d）中的疏水層析柱平衡液為0.02－0.2M磷酸鹽緩沖液，（NH₄）₂SO₄濃度為0.5－2.0M，pH6－9，洗脫液為0.02－0.2M磷酸鹽緩沖液，（NH₄）₂SO₄濃度為0.2－1.0M，pH6－9。

9.根據權利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟e）洗脫峰上陰離子交換柱之前對洗脫峰進行超濾濃縮，調節pH6－9，電導0.5－5mS/cm。

10.根據權利要求1所述從尿液中制備人血白蛋白的方法，其特征在于，步驟e）中的陰離子交換層析柱平衡液為0.02－0.2M磷酸鹽緩沖液，NaCl濃度為0.1－1.0M，pH6－9；洗脫液為0.02－0.2M磷酸鹽緩沖液，NaCl濃度為0.5－2.0M，pH6－9。