[發明專利]一種提高棲熱菌海藻糖合成酶含量的方法

有效

• 申請號: 201310729535.8
• 申請日: 2013-12-26
• 公開（公告）號: CN103695407A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 董永勝;馬蕾;段元良
• 申請（專利權）人: 齊魯工業大學
• 主分類號: C12N9/90
• 分類號: C12N9/90;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種提高棲熱菌海藻糖合成酶含量的方法，其特征是，步驟如下：

（1）從試管斜面上挑取1-2環棲熱菌菌株接種到液體種子培養基中，在65～70℃、100～150r/min下培養12～16h，制得活化后的液體種子，然后將液體種子按體積比3%～5%的接種量接種到液體培養基中，在60～70℃、150～200r/min下培養20～24h，制得菌株細胞培養液；

（2）將菌株細胞培養液置于壓力反應器內，在0.5～2.0MPa壓力下發酵1～6h，發酵條件為60～70℃、150～200r/min，制得發酵液；

（3）將發酵液離心，收集菌體細胞，破碎細胞，制得細胞破碎液，然后將細胞破碎液采用雙水相萃取體系制備海藻糖合成酶。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中的棲熱菌菌株為水生棲熱菌（Thermos?aquatics?）ATCC33923或棲熱菌屬菌(Thermos?sp.)?ATCC?43815。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中的液體種子培養基的組分為：葡萄糖10g/L，酵母膏10g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，pH7.5，蒸餾水1000mL。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中的液體培養基的組分為：葡萄糖20g/L，麥芽糖5～10g/L，酵母膏5g/L，蛋白胨5g/L，KH₂PO₄?2g/L，MgSO₄?1g/L，pH7.5，蒸餾水1000mL。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）中的采用雙水相萃取體系制備海藻糖合成酶的步驟如下：向細胞破碎液中加入硫酸銨和分子量為2000的聚乙二醇，在總體系中使硫酸銨的質量百分比濃度為8wt%～10wt%、聚乙二醇的質量百分比濃度為10wt%～12wt%，混合均勻，靜置分相，制得硫酸銨下相溶液和含有海藻糖合成酶的聚乙二醇上相溶液；向聚乙二醇上相溶液中加入硫酸銨，使硫酸銨在總體系中的質量百分比濃度為5wt%～6wt%，調節溶液的pH值為7.0～8.0，混合均勻，靜置分相，制得含有海藻糖合成酶的硫酸銨下相溶液和聚乙二醇上相溶液；將制得的硫酸銨下相溶液，采用超濾膜過濾濃縮，收集截留液，冷凍干燥，制得海藻糖合成酶。