[發明專利]醇脫氫酶突變體及其應用

有效

• 申請號: 201310727759.5
• 申請日: 2013-12-25
• 公開（公告）號: CN103642765A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 嚴明;許琳;邱曉鸞
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12N15/70;C12N1/21;C12P7/62
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

1.醇脫氫酶突變體，為野生型醇脫氫酶的氨基酸發生如下任意一種情況的突變：

（1）野生型醇脫氫酶的氨基酸序列中第35位絲氨酸突變為天冬氨酸；

（2）野生型醇脫氫酶的氨基酸序列中第35位絲氨酸突變為天冬氨酸，且第36位精氨酸突變為異亮氨酸；

（3）野生型醇脫氫酶的氨基酸序列中第34位丙氨酸、纈氨酸、或半胱氨酸突變為異亮氨酸，且第35位絲氨酸突變為天冬氨酸，且第36位精氨酸突變為異亮氨酸；

（4）野生型醇脫氫酶的氨基酸序列中第13位絲氨酸突變為丙氨酸，且第34位丙氨酸、纈氨酸、或半胱氨酸突變為異亮氨酸，且第35位絲氨酸突變為天冬氨酸，且第36位精氨酸突變為異亮氨酸；

其中，所述的野生型醇脫氫酶的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2、4、6或8中的任意一項所示。

2.一種重組質粒，其特征在于，它是含有編碼權利要求1所述的醇脫氫酶突變體的基因序列的質粒。

3.根據權利要求2所述的重組質粒，其特征在于，所述的質粒為pET24a(+)。

4.一種重組菌，其特征在于，它是含有權利要求2所述重組質粒的菌株。

5.根據權利要求4所述的重組菌，其特征在于，宿主細胞為大腸桿菌E.coliBL21(DE3)。

6.權利要求1所述的醇脫氫酶突變體在催化前手性羰基化合物進行不對稱還原反應形成手性醇中的應用。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述的前手性羰基化合物為4-氯乙酰乙酸乙酯。

8.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述的手性醇為(S)-4-氯-3羥基丁酸乙酯。

9.根據權利要求6～8中任意一項所述的應用，其特征在于，以4-氯乙酰乙酸乙酯為底物，以醇脫氫酶突變體為催化劑，不對稱還原反應制備得到(S)-4-氯-3羥基丁酸乙酯；具體反應條件為：3U/mL的醇脫氫酶突變體與100mM甲酸鈉、50g/L的4-氯乙酰乙酸乙酯、6U/mL的甲酸脫氫酶和0.5mM的NAD⁺，在pH6.5、30℃、200rpm條件下反應12h，得到(S)-4-氯-3羥基丁酸乙酯。