[發明專利]一種雨城丹桂愈傷組織分化及增殖方法

有效

• 申請號: 201310725163.1
• 申請日: 2013-12-25
• 公開（公告）號: CN103733998A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 王良桂;楊秀蓮;王亞莉;張春霞;凌敏
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 邱興天

技術領域

本發明屬于植物組培技術領域，具體涉及一種雨城丹桂愈傷組織分化及增殖方法。

背景技術

桂花（Osmanthus?fragrans?Lour.），亦稱山桂、巖桂、九里香、木犀，木犀科木犀屬的代表種，常綠灌木至小喬木。它不僅是我國的十大傳統名花之一，而且集綠化、美化、香化為一體，屬觀賞和實用兼具的優良園林、經濟樹種，深受我國人民的喜愛。

雨城丹桂（Osmanthus?fragrans?‘Yucheng?Dan’）是丹桂品種群中的一個優良品種，常綠大灌木，樹冠卵形，花期9月中旬，著花繁密花冠斜展，花色橙紅香味中等，觀賞性極佳。此外環境適應性強，耐高溫較耐寒，對土壤的要求不太嚴格，生長速度快，種植范圍廣，如此之多的優點使之在丹桂家族中成為珍貴的品種。

以往桂花的繁殖多以嫁接為主，扦插、壓條為輔，繁殖系數小；播種繁殖存在生理后熟等原因，不能滿足生產上的需要；而雨城丹桂花冠雌蕊退化，花后不結實，采用何種途徑使之快速繁育成為很有價值的研究方向。組織培養作為新興的生物繁殖技術，不但繁殖系數大，還能保持品種的優良性狀，同時也是高等植物細胞工程、基因工程和改良的重要基礎之一，可以短時間獲得大量植物材料，從而使雨城丹桂得到快速繁殖與推廣。而目前關于雨城丹桂組織培養快繁體系研究的內容較少，還不能滿足使用需求。

發明內容

發明目的：針對現有技術中存在的不足，本發明的目的是提供一種雨城丹桂愈傷組織分化及增殖方法，為短時間內獲得大量雨城丹桂小苗提供了科學的培養基配方，豐富了雨城丹桂這一珍貴的桂花品種的組織培養快繁方法，為以后的相關研究提供一些借鑒和參考意義。

技術方案：為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下：

一種雨城丹桂愈傷組織分化及增殖方法，包括以下步驟：

1）從健康茁壯的雨城丹桂樹上，選取盛花期時的新鮮花梗，進行消毒處理；

2）無菌條件下，將處理后的材料接種于誘導及分化培養基上，溫度25±1℃，全黑暗條件下，培養至分化；其中，誘導及分化培養基為：B5+6-BA2.0~3.0mg/L+2,4-D0.05mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6.8g/L，pH5.5；

3）將已分化的愈傷組織接種于增殖培養基中，溫度25±1℃，光照時間為12h/天，光照強度為2500lx，25天繼代增殖一次，即可；其中，增殖培養基為：B5+6-BA3.0mg/L+NAA0.10mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6.8g/L，pH?5.5。

步驟1）中，從健康茁壯的雨城丹桂樹上選取盛花期時的新鮮花梗，先用加入少量去污粉的自來水浸泡1小時，然后用流水沖洗3小時；在水平超凈工作臺的無菌條件下，將沖洗過的花梗在75%的酒精中浸泡30秒后，在2%的次氯酸鈉溶液中浸泡3分鐘，再用無菌水仔細沖洗5遍。

步驟2）中，誘導及分化培養基為：B5+6-BA2.0mg/L+2,4-D0.05mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6.8g/L，pH5.5。

采用誘導及分化培養基B5+6-BA2.0~3.0mg/L+2,4-D0.05mg/L，這種激素配比的培養基配方，經過30天的培養，愈傷組織的分化率較高，達到90%，而且整個花梗變成愈傷組織團狀愈傷，淡黃白色顆粒，狀態較好。

采用增殖培養基為B5+6-BA3.0mg/L+NAA0.10mg/L，這種激素配比的培養基配方，經過25天的培養，愈傷組織的增殖系數較高，可以達到1.8。

有益效果：與現有技術相比，本發明的雨城丹桂愈傷組織分化及增殖方法，以花梗為外植體進行愈傷組織的分化及增殖培養，采用誘導及分化培養基B5+6-BA2.0mg/L+2,4-D0.05mg/L進行誘導，經過30天的培養，愈傷組織的分化率較高，達到90%，而且整個花梗變成愈傷組織團狀愈傷，淡黃白色顆粒，狀態較好；采用增殖培養基為B5+6-BA3.0mg/L+NAA0.10mg/L進行繼代增殖，經過25天的培養，愈傷組織的增殖系數較高，可以達到1.8，具有很好的實用性，可為后期的叢生芽誘導和基因改良工作提供大量的實驗材料。

附圖說明

圖1是雨城丹桂花梗愈傷組織分化示意圖。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明做進一步的說明。

實施例1