[發(fā)明專利]葡聚糖的制備

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310718360.0
• 申請日: 2007-06-15
• 公開（公告）號: CN103833867B
• 公開（公告）日: 2017-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: A.梅吉;J.羅爾克;楊仁德
• 申請（專利權(quán)）人: 生物高聚物工程公司DBA生物治療公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/716;A61P37/04
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 劉力,李進

本申請是申請日為2007年6月15日、申請?zhí)枮?00780029944.X、發(fā)明名稱為“葡聚糖的制備”的發(fā)明專利申請的分案申請。

發(fā)明背景

本申請要求2006年6月15日提交的美國序列號60／813,971、題為葡聚糖的制備的權(quán)益。

本發(fā)明涉及包含β-葡聚糖的組合物。更具體地說，本發(fā)明涉及可溶性β-葡聚糖組合物及其在干細胞動員中的用途。

葡聚糖往往被描述為葡萄糖的聚合物，并衍生自酵母、細菌、真菌和植物，例如燕麥或大麥。已知含β(1-3)-連接的吡喃葡萄糖主鏈的葡聚糖具有生物學(xué)活性，尤其是，已經(jīng)表明它們調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，更近期地，介導(dǎo)造血干細胞和祖細胞(HSPC)的動員。

各種癌癥的治療日益涉及減少細胞數(shù)的治療，包括高劑量化療或放射療法。這些治療使患者的白細胞數(shù)下降，抑制骨髓造血活性，并增加他們感染和／或出血的風(fēng)險。因此，接受減少細胞數(shù)的治療的患者也必須接受治療，以重新恢復(fù)骨髓功能(造血作用)。

盡管在干細胞動員和技術(shù)方面取得進展，高達20-25％的患者表現(xiàn)出不良的動員，并不能進行自體移植。PGGβ-葡聚糖是可溶性酵母衍生的多糖，先前已經(jīng)表現(xiàn)出介導(dǎo)造血干細胞和祖細胞(HSPC)的動員。

發(fā)明概述

在本發(fā)明中，酵母被培養(yǎng)、收獲和純化，生成基本不含污染有揮發(fā)性有機化合物(VOCs)的微粒β-葡聚糖。通過使酵母細胞或其片段經(jīng)受去除宿主細胞雜質(zhì)的一系列的堿、表面活性劑和酸提取，制備微粒β-葡聚糖。

經(jīng)以上工藝或經(jīng)現(xiàn)有工藝方法生產(chǎn)的微粒β-葡聚糖在升高的溫度和壓力下可溶解于酸性溶液。然后，澄清和先后采用疏水相互作用的層析(HIC)、凝膠滲透層析(GPC)純化所生成的可溶性β-葡聚糖。作為藥劑，以較高劑量給予可溶性β-葡聚糖，而無增加的或?qū)嶋H上減少的可觀察到的副作用或不利結(jié)果。

圖的簡述

圖1是生產(chǎn)微粒β-葡聚糖的方法的示意圖。

圖2是生產(chǎn)可溶性β-葡聚糖的方法的示意圖。

發(fā)明詳述

微粒β-葡聚糖

圖1是從酵母生產(chǎn)不溶的或微粒β-葡聚糖的方法10的概況，它包括步驟12-22。在步驟12中，酵母培養(yǎng)基典型地在搖瓶或發(fā)酵桶中生長。用于本發(fā)明的酵母株可為任何株，其實例包括釀酒酵母(Saccharomyces(S.)cerevisiae)、德爾布酵母(S.delbrueckii)、羅斯酵母(S.rosei)、小橢圓酵母(S.microellipsodes)、卡爾酵母(S.carlsbergensis)、二孢酵母(S.bisporus)、發(fā)酵性酵母(S.fermentati)、魯酵母(S.rouxii)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces(K.)lactis)、脆壁克魯維酵母(K.fragilis)，多孢克魯維酵母(K.polysporus)、白假絲酵母(Candida(C.)albicans).陰道假絲酵母(C.cloacae)、熱帶假絲酵母(C.tropicalis)、產(chǎn)朊假絲酵母(C.utilis)、溫奇漢遜酵母(Hansenula(H.)wingei)、arni漢遜酵母(H.arni)、亨利漢遜酵母(H.henricii、美國漢遜酵母(H.americana)、加拿大漢遜酵母(H.canadiensis)、碎囊漢遜酵母(H.capsulata)、多形漢遜酵母(H.polymorpha)、克魯弗畢赤酵母(Pichia(P.)kluyveri)、巴斯德畢赤酵母(P.pastoris)、多形畢赤酵母(P.polymorpha)、羅丹畢赤酵母(P.rhodanesis)、奧默畢赤酵母(P.ohmeri)、牛球擬酵母(Torulopsis(T.)bovina)和光滑球擬酵母(T.glabrata)。

在批量生產(chǎn)的一個實施方案中，從酵母培養(yǎng)開始，經(jīng)搖動燒瓶培養(yǎng)基逐步擴大到250-L規(guī)模的生產(chǎn)發(fā)酵桶。酵母在富含維生素，例如葉酸、肌醇、煙酸、泛酸(鈣和鈉鹽)、吡哆醇HCl和胸腺嘧啶HCl和來自化合物例如氯化鐵六水合物；氯化鋅；氯化鈣二水合物；鉬酸；硫酸銅五水合物和硼酸的微量金屬的葡萄糖-硫酸銨培養(yǎng)基中生長。在約0.02％濃度時，也可加入消泡劑，例如防沫劑(Antifoam)204。