[發(fā)明專利]治療腎功能衰竭的選擇性細胞療法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310717515.9
• 申請日: 2008-06-06
• 公開（公告）號: CN103865871A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: A.阿塔拉;J.尤
• 申請（專利權(quán)）人: 韋克福里斯特大學健康科學院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61K35/23;A61P13/12;A61P7/06
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 萬雪松

本申請是申請日為2008年6月6日的中國專利申請200880102321.5“治療腎功能衰竭的選擇性細胞療法”的分案申請。

相關(guān)申請

本申請要求保護在2007年6月8日提交的美國臨時專利申請系列號60/942,716的35U.S.C.§119(e)下的權(quán)益，其公開內(nèi)容以其全文引用的方式合并入本文。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明在用于恢復(fù)器官功能的選擇性細胞療法的領(lǐng)域內(nèi)

背景技術(shù)

慢性腎功能衰竭的特征在于腎功能的漸進喪失，并且最終可進行至終末期腎功能衰竭，此時腎不再以維持身體的水平發(fā)揮功能作用。終末期腎功能衰竭是牽涉受累者的多個器官的破壞性疾病。在美國終末期腎病的最常見病因是糖尿病。

由腎臟進行的功能之一是產(chǎn)生促紅細胞生成素(EPO)。當腎正常發(fā)揮功能時，腎間質(zhì)中的低組織氧合作用(tissue?oxygenation)刺激間質(zhì)細胞產(chǎn)生EPO。分泌的EPO接著刺激骨髓中紅細胞產(chǎn)生，這使組織氧壓恢復(fù)至正常水平。由無效造血(ineffective?hematopoiesis)所致的貧血是由于腎減小的產(chǎn)生EPO的能力引起的慢性腎功能衰竭的不可避免的一個結(jié)果。也已報導(dǎo)EPO具有抗氧化應(yīng)激和細胞凋亡的保護作用。

腎是身體中EPO的主要產(chǎn)生者，從而是治療腎功能衰竭誘導(dǎo)的貧血的主要靶。雖然透析可延長許多終末期腎病患者的存活，但目前只有腎移植才可恢復(fù)正常功能。然而，腎臟移植嚴重受限于臨床供體不足。

多年來用于緩解與腎功能衰竭相關(guān)的貧血的治療包括反復(fù)地輸入紅細胞以及施用睪酮和其他促蛋白合成類固醇(anabolic?steroid)。然而，此類治療方法一直以來沒有一個是完全令人滿意的。接受反復(fù)輸血的患者遭受鐵超負荷(iron?overload)，并且可產(chǎn)生抗主要組織相容性抗原的抗體。睪酮對骨髓中紅細胞生成作用最小，并且其與不期望的男性化副作用相關(guān)。

之前減輕與腎功能衰竭相關(guān)的貧血的努力包括施用純化的重組EPO(參見，授予例如Cheung等人的美國專利6,747,002，授予Westenfelde等人的6,784，154)。然而，重組EPO的施用只是暫時提高了血液中的EPO水平，并且可導(dǎo)致缺鐵癥。也一直在尋求其中使用轉(zhuǎn)染的宿主細胞產(chǎn)生EPO的基因治療方法(參見，例如，授予Selden等人的美國專利5,994，127，授予Aebischer等人的5,952,226，授予Carcagno等人的6,777,205；Rinsch等人(2002)Kidney?International62：1395-1401)。然而，這些方法牽涉非腎細胞的轉(zhuǎn)染，并且需要在移植后防止抗原識別和免疫排斥的技術(shù)例如細胞包囊化(cell?encapsulation)。此外，使用外源DNA的轉(zhuǎn)染可能是不穩(wěn)定的，隨著時間的過去，細胞可喪失它們表達EPO的能力。

基于腎細胞的替換腎組織的方法受到對鑒定腎細胞和以足夠的數(shù)量擴增其的需要的限制。此外，用于腎組織工程目的的腎細胞的培養(yǎng)因腎的獨特結(jié)構(gòu)和細胞異質(zhì)性而特別困難。腎臟是具有多種功能(包括廢物排泄、身體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定(body?homeostasis)、電解質(zhì)平衡、溶質(zhì)運輸以及激素產(chǎn)生)的復(fù)雜器官。

仍然存在對用于緩解腎細胞的衰竭所致的貧血以產(chǎn)生足夠量的促紅細胞生成素的備選治療選擇的巨大需要。

發(fā)明內(nèi)容

在本發(fā)明的實施方案中本文提供了從已進行了傳代和/或體外擴增的腎的分化細胞收獲的分離的腎細胞群體。在一些實施方案中，腎細胞包括腎臟的腎小管周圍間質(zhì)細胞和/或內(nèi)皮細胞。在一些實施方案中，腎細胞由或基本上由獲自腎組織的并且體外傳代的腎的腎小管周圍間質(zhì)細胞和/或內(nèi)皮細胞組成。在一些實施方案中，細胞產(chǎn)生促紅細胞生成素(EPO)。在另外的實施方案中，選擇腎細胞來進行EPO產(chǎn)生。

還提供了產(chǎn)生分離的產(chǎn)生EPO的細胞群體的方法，該方法包括步驟：1)收獲分化腎細胞；和2)將分化腎細胞傳代，其中細胞在所述傳代后產(chǎn)生EPO；從而產(chǎn)生分離的產(chǎn)生EPO的細胞群體。在一些實施方案中，方法還包括選擇分化腎細胞來進行EPO產(chǎn)生的的步驟。在一些實施方案中，傳代步驟包括在包含胰島素轉(zhuǎn)鐵蛋白硒(ITS)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)分化腎細胞。